ساخت پلاسمید نوترکیب بیان کننده ژن AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت باکتریوفاژ لامبدا

حافظی, نسیم; عجمی, ابوالقاسم; ولدان, رضا

دوره 29، شماره 172 - ( اردیبهشت 1398 ) جلد 29 شماره 172 صفحات 109-100 | برگشت به فهرست نسخه ها

Mendeley

Zotero

RefWorks

Hafezi N, Ajami A, Valadan R. Construction of the Recombinant Plasmid Expressing AID under the Control of Temperature-sensitive Promoter of Bacteriophage Lambda. J Mazandaran Univ Med Sci 2019; 29 (172) :100-109
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-10914-fa.html

حافظی نسیم، عجمی ابوالقاسم، ولدان رضا. ساخت پلاسمید نوترکیب بیان کننده ژن AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت باکتریوفاژ لامبدا. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. 1398; 29 (172) :100-109

URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-10914-fa.html

ساخت پلاسمید نوترکیب بیان کننده ژن AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت باکتریوفاژ لامبدا

نسیم حافظی

، ابوالقاسم عجمی

، رضا ولدان

چکیده: (2546 مشاهده)

سابقه و هدف: آنزیم Activation-induced cytidine deaminase (AID) یک آنزیم اختصاصی لنفوسیت‌هایB در هایپرموتاسیون سوماتیک و نوترکیبی تعویض کلاس ژن‌های آنتی‌بادی در فولیکول های لنفوسیت B ارگان های لنفاوی محیطی می‌باشد. بیان نا به جای این آنزیم منجر به موتاسیون در سلول‌های غیر از لنفوسیت‌های B و حتی در باکتری Escherichia coli شده است. با این وجود، القای موتاسیون در باکتری Escherichia coli توسط بیان آنزیم AID، نیازمند بهینه سازی شرایط مطلوب و کنترل شده می باشد. بنابراین هدف این مطالعه تولید یک پلاسمید بیانی AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا می‌باشد.
مواد و روش‌ها: در مرحله اول، جداسازی ژن AID از پلاسمید نوترکیب PGEMT حاوی AID انجام شد. ژن تخلیص شده در پلاسمید PTG19-T در باکتری E.coli سوش Top10 کلون شد و سپس در یک پلاسمید بیانی القایی با دما حاوی پروموتر چپ باکتریوفاژ لامبدا و رپرسور حساس به حرارت cI857 منتقل و در باکتری E.coli قرار داده شد. در مرحله آخر، ژن مقاومت به تتراسایکلین جایگزین ژن مقاومت این پلاسمید نوترکیب شد.
یافته‌ها: ژن AID در پلاسمید حاوی رپرسور حساس به حرارت cI857 از باکتریوفاژ لامبدا انتقال یافت. صحت توالی و چارچوب خوانش توسط الکتروفورز محصولPCR، استفاده از روش‌های هضم آنزیمی وهمچنین تعیین توالی ژنAID، تایید شد.
استنتاج: ژن AID به‌طور موفقیت‌آمیزی در پلاسمید حاوی پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا کلون شد. این پلاسمید نوترکیب می تواند در سویه های مختلف باکتریE.coli جهت تولید سویه های mutator استفاده شود.

واژه‌های کلیدی: AID، سویه mutator، پروموتر چپ فاژ لامبدا

متن کامل [PDF 811 kb] (1185 دریافت)

نوع مطالعه: پژوهشي-کامل | موضوع مقاله: ايمونولوژي

ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
	این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

Designed & Developed by : Yektaweb