دوره 26، شماره 145 - ( بهمن 1395 )                   جلد 26 شماره 145 صفحات 45-53 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


چکیده:   (5006 مشاهده)

سابقه و هدف: فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا فلوک‌های کبدی شایعی بوده که روی انسان‌ها و دام‌ها در تمام نقاط جهان اثرگذار هستند. در مطالعه حاضر ما تکنیک سریع loop-mediated isothermal amplification (LAMP) را در تشخیص و افتراق گونه‌های فاسیولا ارزیابی نمودیم.

مواد و روش‌ها: تعداد 50 کرم فاسیولا از کبد گاو و گوسفند کشتارگاه‌های استان مازندران جداسازی شدند. تعداد 8 پرایمر جهت تکثیر ناحیه ژنی 28S ribosomal RNA برای واکنش LAMP برای گونه‌های فاسیولا طراحی گردید. واکنش LAMP در حجم µI 20 تحت شرایط تک دمایی در0C 60 به مدت 90 دقیقه انجام گرفت. نتایج تکثیر با دیدن رسوب با استفاده از چشم غیر مسلح، استفاده از رنگ فلوئورسانس و ژل الکتروفورز بررسی شد. اختصاصیت روش LAMP برای فاسیولا با استفاده از DNA انگل‌های دیکروسلیوم دندریتیکم، تریکواسترونژیلوس کالابریفورمیس و اکینوکوکوس گرانولوزوس مورد سنجش قرار گرفت. جهت ارزیابی محدودیت تشخیص روش LAMP برای تعیین جنس فاسیولا رقت سریالی از DNA استخراج شده مورد استفاده قرار گرفت.

یافته‌ها: واکنش مثبت LAMP با استفاده از پرایمرهای اختصاصی دو گونه تعداد زیادی باند در سایزهای متفاوت در دمای 0C60 طی مدت 90 دقیقه تولید نمود. شرایط مطلوبی بدون هیچ واکنشی با سایر DNA انگل‌ها ایجاد گردید. محدودیت تشخیص روش LAMP تا pg 1 تعیین گردید. نتایج تشخیص رسوب و رنگ فلوئورسانس با الکتروفورز با ژل آگارز همخوانی داشتند.

استنتاج: نتایج ما نشان دادند که روش LAMP یک روش سریع، آسان، کم هزینه با اختصاصیت بالا و معتبر جهت افتراق گونه‌های فاسیولا در مطالعات اپیدمیولوژیکی و بالینی فاسیولوزیس انسانی و دامی در مناطق اندمیک می‌باشد.

متن کامل [PDF 756 kb]   (1176 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل | موضوع مقاله: انگل شناسي