TY - JOUR JF - J-Mazand-Univ-Med-Sci JO - J Mazandaran Univ Med Sci VL - 28 IS - 167 PY - 2018 Y1 - 2018/12/01 TI - Applying High-quality DNA Melting Curve Analysis in Identifying Staphylococcus aureus and Methicillin-resistant Strains TT - آنالیز منحنی ذوب DNA با کیفیت بالا (HRM) به منظور شناسایی استافیلوکوک اورئوس و سویه مقاوم به متی سیلین N2 - سابقه و هدف: آنالیز منحنی ذوب DNA با کیفیت بالا (HRM) یکی از حساس‌ترین و دقیق‌ترین روش‌ها جهت شناسایی استافیلوکوک اورئوس و مقاومت به متی سیلین است. این مطالعه با هدف آنالیز منحنی ذوب DNA با کیفیت بالا، به منظور شناسایی سویه های استافیلوکوک اورئوس مقاوم به متی سیلین انجام پذیرفت. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، از سویه‌های استاندارد استافیلوکوک اورئوس ATCC25923 و ATCC 33592 استفاده شد. جهت شناسایی استافیلوکوک اورئوس از ژن ITS، و مقاومت به متی‌سیلین از ژن mecA استفاده گردید. با استفاده از نرم‌افزارهای StepOne Software v2.3 و HRM Software v3.0.1 تجزیه و تحلیل انجام شد و نتایج تعیین توالی به عنوان گلد ‌استاندارد مورد استفاده قرار گرفت. یافته‌ها: حساسیت آنالیتیکی روش PCR با استفاده از پرایمر ITS قادر به شناسایی CFU 104 باکتری بوده و برای ژن mecA تا CFU 103 باکتری را تشخیص داد. حسایت آنالیتیکی روش HRM نیز برای پرایمر ژن ITS تا رقت CFU 2-10 و پرایمر ژن mecA تا رقت CFU 5-10 قدرت شناسایی باکتری را داشته است. در تجزیه و تحلیل نتایج HRM نیز کم‌ترین مقدار خطا در منحنی‌ها ذوب DNA مشاهده گردید به طوری که، با در نظر گرفتن نزدیک ترین بازه دمایی به منظور تجزیه و تحلیل، دمای ذوب برای ژن ITS مقدار 5/0± 86 درجه سلسیوس و برای ژن mecA مقدار 5/0± 81 درجه سلسیوس به دست آمد. نتایج دما و تعیین توالی اختصاصیت بالای روش HRM را نشان داد. استنتاج: روش HRM از نظر تشخیص مقدار کم باکتری، دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی می باشد. SP - 83 EP - 93 AU - Tahmasebi, Hamed AU - Dehbashi, Sanaz AU - Arabestani, Mohammad Reza AD - Associate Professor, Department of Microbiology, Hamadan University of Medical Sciences, Hamadan, Iran Brucellosis Research Center, Hamadan University of Medical Sciences, Hamadan, Iran KW - Staphylococcus aureus KW - Methicillin resistance KW - DNA Melting Curve KW - HRM UR - http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-11371-fa.html ER -