TY - JOUR T1 - Designing and Constructing the Lentiviral Vector Coding miRNA-499a and Transduction of Human Mesenchymal Stem Cells TT - طراحی و ساخت حامل لنتی ویروسی بیان کننده miRNA-499a و انتقال آن‌ به سلول ‌های بنیادی مزانشیمی انسان JF - J-Mazand-Univ-Med-Sci JO - J-Mazand-Univ-Med-Sci VL - 28 IS - 166 UR - http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-11141-fa.html Y1 - 2018 SP - 21 EP - 29 KW - lentiviral vectors KW - MicroRNA KW - miRNA-499a-3p/5p KW - differentiation N2 - سابقه و هدف: وکتورهای لنتی‌‌ویروسی حامل‌های مناسبی برای انتقال ژن به سلول‌ها بوده و می‌توانند سبب بیان بالا و مداوم ژن‌‌ها در سلول‌های میزبان شوند. ریز RNA ها (miRNAs )، گروهی از RNA های غیر کد‌کننده کوچک هستند که بیان ژن را پس از رونویسی از طریق مهار ترجمه یا القاء تجزیه mRNA کنترل می‌کنند و از این طریق فرآیند‌‌های زیستی متعددی از جمله تمایز سلولی را تنظیم می‌‌نمایند. مطالعاتی نشان داده‌اند که miRNA-499a در تمایز سلول‌های بنیادی به سلول‌های قلبی نقش دارد. با توجه به مطالب ذکر شده، در این مطالعه ساخت وکتور لنتی‌‌ویروسی ناقل miRNA-499a جهت استفاده در تمایز سلول‌‌های قلبی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‌ها: رشته‌‌های p3 و p5 مربوط به miRNA-499a طراحی و ساخته شده و در پلاسمید ویژه‌‌ای کلون شدند. برای اطمینان از ورود صحیح این رشته‌های نوکلئوتیدی، هضم آنزیمی و توالی‌‌یابی انجام گردید. سپس ذرات لنتی‌ویروسی حامل رشته‌‌های miRNA-499a-3p و p5miRNA-499a- ساخته شدند و برای ترانس‌‌داکشن سلول‌های مزانشیمی مغز استخوان انسان مورد استفاده قرار گرفتند. یافته‌ها: نتایج حاصل از هضم آنزیمی و توالی‌‌یابی، کلون شدن صحیح رشته‌‌های p3 و p5 مربوط به miRNA-499a به داخل پلاسمید را نشان دادند. بیان بالای eGFP نشان دهنده کارایی بالای ترانس‌‌فکشن و ترانس‌داکشن بود. ویروس‌‌های حامل رشته‌‌های miRNA-499a-3p/5p ساخته شده، توانستند سبب ترانس‌داکشن سلول‌‌های بنیادی مزانشیمی گردند. استنتاج: در این مطالعه حامل‌‌های لنتی‌ویروسی ناقل miRNA-499a-3p/5p تولید شدند، که با توجه به میزان مناسب ترانس‌‌داکشن سلول‌‌های بنیادی مزانشیمی، می‌توانند در تمایز این سلول‌‌ها به سلول‌‌های قلبی مورد استفاده قرار گیرند. M3 ER -