fa اثر سایتوتوکسیک مهارکنندگان زیرواحد کاتالیتیکی (hTERT) و نوکلئوتیدی (hTERC) تلومراز در سلول های لوسمی پرومیلوسیتیک حاد هماتولوژی و انکولوژی کودکان Pediatric Hematology and Oncology پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL"><span style="letter-spacing:-0.1pt;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span><span style="letter-spacing:-0.1pt;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span> <span style="font-family:b zar;">نقش مهم آنزیم تلومراز در پاتوژنز لوسمی پرومیلوسیتیک حاد (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Acute promyelocytic leukemia</span></span><span style="font-family:b zar;">) (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">APL</span></span><span style="font-family:b zar;">) و هم چنین نقش این آنزیم ترنسکریپتاز معکوس در عود بیماری، ما را بر آن داشت تا اثر سایتوتوکسیک مهار تلومراز با کمک الیگونوکلئوتید مهارکننده زیرواحد نوکلئوتیدی (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">hTERC antisense</span></span><span style="font-family:b zar;">) و مولکول کوچک مهارکننده زیرواحد کاتالیتیکی </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">(BIBR1532)</span></span><span style="font-family:b zar;"> را در سلول های مشتق شده از </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">APL</span></span><span style="font-family:b zar;"> مورد مطالعه قرار دهیم.<span style="letter-spacing:-0.1pt;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-0.1pt;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span><span style="letter-spacing:-0.1pt;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="letter-spacing:-0.1pt;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span><span style="font-family:b zar;"> در این مطالعه تجربی، جهت بررسی این که آیا مهار تلومراز با کمک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">hTERC antisense</span></span><span style="font-family:b zar;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BIBR1532</span></span><span style="font-family:b zar;"> می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">تواند اثر سایتوتوکسیک در </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">APL</span></span><span style="font-family:b zar;"> داشته باشد، سلول</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">NB4</span></span><span style="font-family:b zar;"> که رده سلولی مشتق شده از </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">APL</span></span><span style="font-family:b zar;"> است، با غلظت</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های مختلف از مهارکنندگان تیمار شدند و سپس زنده</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">مانی سلول</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">ها، فعالیت متابولیک و القاء آپوپتوز به ترتیب با <span style="letter-spacing:-.2pt;">استفاده از روش</span></span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-family:b zar;">های تریپان بلو، </span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-family:b zar;"> و رنگ</span></span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-family:b zar;">آمیزی </span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-size:10.0pt;">Annexin/PI</span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-family:b zar;"> ارزیابی شد. هم چنین برای بررسی مکانیسم</span></span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="font-family:b zar;">های مولکولی اثر مهارکنندگان، فعالیت آنزیماتیک کاسپاز 3 و تغییرات رونویسی از ژن های مرتبط با آپوپتوز مورد مطالعه قرار گرفت.</span></span><span style="font-family:b zar;"></span><br> <span style="letter-spacing:-0.2pt;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span><span style="letter-spacing:-0.2pt;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="letter-spacing:-0.2pt;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span> <span style="font-family:b zar;">نتایج به</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">دست آمده از این تحقیق نشان داد که هدف قرار دادن تلومراز با استفاده از </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">hTERC antisense</span></span><span style="font-family:b zar;"> در غلظت </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">45 pmol/L</span></span><span style="font-family:b zar;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BIBR1532</span></span><span style="font-family:b zar;"> در غلظت</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">75 &micro;L </span></span><span style="font-family:b zar;">&nbsp;میزان بقاء سلول</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">NB4</span></span><span style="font-family:b zar;"> را پس از گذشت 24 و 48 ساعت به ترتیب به میزان تقریبی 20 و 40 درصد کاهش داده و آپوپتوز وابسته به کاسپاز را در این رده سلولی فعال می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">نماید. هم</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">چنین، نتایج نشان دادند که مهار </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">c-Myc</span></span><span style="font-family:b zar;"> و متعاقباً افزایش نسبت بیان </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">Bax/Bcl-2</span></span><span style="font-family:b zar;"> همراه با کاهش فعالیت تلومراز ممکن است مکانیسم دخیل در بروز اثر سایتوتوکسیک هر دو مهارکننده در سلول</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">NB4</span></span><span style="font-family:b zar;"> باشند.</span><br> <span style="letter-spacing:-0.2pt;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span><span style="font-family:b zar;"> نتایج این مطالعه آشکار می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">کند که </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BIBR1532</span></span><span style="font-family:b zar;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">hTERC antisense</span></span><span style="font-family:b zar;"> دارای اثرات ضدلوسمیک در سلول</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">NB4</span></span><span style="font-family:b zar;"> می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">باشد و درمآن ها برپایه مهار تلومراز می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">تواند برای درمان بیماران مبتلاء به </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">APL</span></span><span style="font-family:b zar;"> مفید باشد.</span><br> &nbsp;</p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Telomerase activity has a major role in acute promyelocytic leukemia (APL). It also has a critical role in disease recurrence. This research aimed at studying the cytotoxic effects of telomerase inhibition using oligonucleotide-based molecule against human telomerase RNA template (hTERC antisense) and non-nucleoside small molecule targeting catalytic subunit (BIBR5132) on APL-derived cell line.<br> <strong>Materials and methods:</strong> To evaluate whether inhibition of telomerase using either hTERC antisense or BIBR5132 could exert cytotoxic effect in APL, NB4 cells were subjected to different concentrations of the inhibitors and subsequent cell viability, metabolic activity, induction of apoptosis were investigated using Trypan blue assay, MTT, and annexin/PI staining, respectively. Also, Caspase-3 enzymatic activity and transcriptional alteration of apoptosis-related target genes were investigated.<br> <strong>Results:</strong> We found that targeting telomerase using hTERC antisense (45 pmol/L) and BIBR1532 (75 &micro;L) for 48 h reduced the survival rate of NB4 cells nearly by 30% and 40%, respectively and induced a caspase-3-dependent apoptosis. Our results also suggest that suppression of c-Myc and subsequent increment of Bax/Bcl-2 ratio coupled with decreased telomerase activity may be rational mechanisms for the cytotoxicity of both telomerase inhibitors against NB4 cells.<br> <strong>Conclusion:</strong> Current results clearly indicated that both BIBR1532 and hTERC antisense had anti-tumor activity against NB4 cells and anti-telomerase-based therapy may be an efficient treatment for acute promyelocytic leukemia.<br> &nbsp;</p> لوسمی پرومیلوسیتیک حاد, آپوپتوز, رده سلولی NB4, تلومراز acute promyelocytic leukemia, apoptosis, NB4 cells, telomerase   10 20 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-7762-3&slc_lang=fa&sid=1 Atieh Pourbagheri-Sigaroodi عطیه پورباقری سیگارودی 100319475328460097973 100319475328460097973 No MSc in Biotechnology, Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University, Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی، دانشکده علوم و فناوری های نوین، واحد علوم دارویی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Ava Safaroghli-Azar آوا صفراوغلی آذر 100319475328460097974 100319475328460097974 No MSc in Hematology, Department of Hematology and Blood Banking, School of Allied Medical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran کارشناسی ارشد خون شناسی و بانک خون، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران Fahimeh Nemati Mansoor فهیمه نعمتی منصور 100319475328460097975 100319475328460097975 No Assistant Professor, Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University, Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran استادیار، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده علوم و فناوری های نوین، واحد علوم دارویی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Davood Bashash داود بشاش d.bashash@sbmu.ac.ir 100319475328460097976 100319475328460097976 Yes Associate Professor, Department of Hematology and Blood Banking, School of Allied Medical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار، گروه خون شناسی و بانک خون، دانشکده پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران