fa تشخیص ژن اختصاصی eae باکتری انتروپاتوژنیک اشرشیاکلی با استفاده از روش نوین PCR-ELISA ميکروبيولوژي Microbiology پژوهشي-کامل Research(Original) <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span></span><em><span style="font-family:b zar;"> اشرشیاکلی</span></em><span style="font-family:b zar;"> انتروپاتوژنیک از اعضای خانواده انتروباکتریاسه، یکی از شایع‌ترین </span><span style="font-family:b zar;">علل اسهال مزمن در <span style="letter-spacing:-.1pt;">کودکان و نوزادان </span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="font-family:b zar;">می باشد. یکی از روش‌های مرسوم جهت تشخیص گونه‌های مختلف <em>اشرشیاکلی</em> انتروپاتوژنیک، </span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;background:white;"><span style="font-family:b zar;">واکنش</span></span><span style="background:white;"><span style="font-family:b zar;"> زنجیره‌ای پلیمراز</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:11.0pt;"> (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:11.0pt;">)</span></span><span style="font-family:b zar;"> می‌باشد که به دلیل استفاده از ژل الکتروفورز و رنگ‌آمیزی با اتیدیوم بروماید دارای معایبی از قبیل صرف زمان، محدودیت در تشخیص تعداد نمونه‌ها و هم‌چنین سمی بودن اتیدیوم بروماید و ژل آگارز می‌باشد. این مطالعه با هدف ارزیابی تکنیک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR-ELISA</span></span><span style="font-family:b zar;"> جهت تشخیص باکتری <em>اشرشیاکلی</em> انتروپاتوژنیک انجام پذیرفت.</span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"> در این مطالعه تجربی، </span><span style="font-family:b zar;">کف</span> <span style="font-family:b zar;">پلیت</span> <span style="font-family:b zar;">الایزا استرپتو آویدین بارگذاری گردید و با استفاده از پروب اختصاصی که قسمت ابتدای آن بیوتینه شده بود، جهت اتصال به ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">eae</span></span></em><span style="font-family:b zar;"> تکثیر شده با روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span> <span style="font-family:b zar;">استفاده گردید. بیوتین متصل به پروب به استرپتو آویدین متصل شده، و ژن تکثیر یافته</span> <span style="font-family:b zar;">نیز به پروب اختصاصی متصل گردید. در نهایت از آنتی</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">بادی ضد دیگوکسیژنین برای شناسایی محصول استفاده شد و واکنش با دستگاه نور سنج اندازه</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">گیری گردید.</span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span> <span style="font-family:b zar;">با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">eae</span></span></em> <em><span style="font-family:b zar;">اشرشیاکلی</span></em><span style="font-family:b zar;"> انتروپاتوژنیک</span><span style="font-family:b zar;"> تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول </span>&nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">bp</span></span><span style="font-family:b zar;">999</span> <span style="font-family:b zar;">بود. نتایج حاصل از </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR-ELISA</span></span> <span style="font-family:b zar;">نشان داد که این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با باکتری</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های هم خانواده خود ندارد و هم</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">چنین میزان حساسیت آن 11 پیکوگرم ارزیابی شد</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"> تکنیک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PCR-ELISA</span></span><span style="font-family:b zar;"> روشی حساس و دقیق بوده که برای شناسایی عوامل بیماری</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">زا با استفاده از ژن اختصاصی آن باکتری به کار می رود. این تکنیک</span> <span style="font-family:b zar;">می</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">تواند جایگزین مناسبی برای تکنیک</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">های قدیمی زمان بر با حساسیت کمتر و هزینه بیش</span><span style="font-family:b zar;">‌</span><span style="font-family:b zar;">تر باشد</span><span style="font-family:b zar;">.</span><br> &nbsp; <strong>Background and purpose:</strong> Enteropathogenic<em> Escherichia coli</em> from <em>Enterobacteriaceae</em> family is one of the most common causes of chronic diarrhea in children and infants. Polymerase Chain Reaction (PCR) method is commonly used for detection of enteropathogenic<em> Escherichia coli</em> species, but there are some disadvantages with this method due to the use of gel electrophoresis and staining with ethidium bromide, including being time consuming, limits on the number of samples, and toxicity of ethidium bromide. The aim of this study was to evaluate the PCR-ELISA technique for detection of enteropathogenic<em> E.coli</em>.<br> <strong>Materials and methods:</strong> In this study, Streptavidin was loaded in ELISA plate, and a specific Biotinylated probe was used to connect the PCR product. Biotinylated probe was connected to Streptavidin and the amplified gene was attached to the probe. Finally, the digoxigenin antibodies were used to identify the PCR product. The reaction was measured with an ELISA reader.<br> <strong>Results:</strong> <em>eae</em> of enteropathogenic<em> Escherichia coli</em> was amplified using the gene specific primers which resulted in a fragment of a 999 bp. The results of PCR-ELISA showed that this technique does not cross-react with the bacteria in their families and its sensitivity was 11 pg.<br> <strong>Conclusion:</strong> PCR-ELISA technique is an accurate and rapid test for detection of infectious agents by the specific gene. PCR-ELISA could be used as an alternative method instead of time-consuming, less sensitive, and expensive techniques.<br> <br> <br> &nbsp; انتروباکتریاسه,اشرشیاکلای انتروپاتوژنیک, eae, PCR-ELISA Enterobacteriaceae, enteropathogenic Escherichia coli, eae, PCR-ELISA 43 55 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-7637-2&slc_lang=fa&sid=1 Samira Rami سمیرا رامی 1003194753284600102866 1003194753284600102866 No MSc in Microbial Biotechnology, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Ghiamdasht Branch, Tehran, Iran کارشناس ارشد بیوتکنولوژی میکروبی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد قیامدشت، تهران، ایران Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 1003194753284600102867 1003194753284600102867 Yes Associate Professor, Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی و انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران Tayebeh Saleh طیبه صالح 1003194753284600102868 1003194753284600102868 No Assistant Professor, Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Ghiamdasht Branch, Tehran, Iran استادیار، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد قیامدشت، تهران، ایران