fa کلونینگ و بیان ژن کد کننده راپتری سیزده (ROP13) سویه RH توکسوپلاسما گوندیی انگل شناسي parasitology پژوهشي-کامل Research(Original) <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span></span> <span style="font-family:b zar;">توکسوپلاسما</span> <span style="font-family:b zar;">گوندیی انگل تک یاخته درون سلولی اجباری می‌باشد. با توجه به شیوع بالای توکسوپلاسموزیس و اهمیت وافر این بیماری در بهداشت عمومی، دستیابی به واکسن موثر و روش های تشخیصی حساس برای این بیماری، بیش از پیش حائز اهمیت است. هدف از این بررسی، شناسایی و</span> <span style="font-family:b zar;">کلون کردن ژن کدکننده پروتئین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span><span style="font-family:b zar;"> سویه </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RH</span></span><span style="font-family:b zar;"> انگل توکسوپلاسما</span> <span style="font-family:b zar;">گوندیی و بیان آن در سلول یوکاریوتیک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CHO</span></span><span style="font-family:b zar;"> بود.</span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">در این تحقیق، ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;ROP13</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">پس از تکثیر با روش </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">، در پلاسمید انتقالی </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;pTG19-T</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">کلون و پس از آن در سوش </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">TOP10</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> باکتری</span></span> <em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli </span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">ترانسفورم شد. سپس ساب کلونینگ ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> در </span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">پلاسمید بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">pcDNA3</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> انجام شد. هم چنین پلاسمید </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">pcROP13</span></span><span style="font-family:b zar;"> <span style="color:black;">در سلول یوکاریوتی </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">CHO</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> ترانسفکت شد و به منظور بررسی بیان ژن نوترکیب از روش </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IFA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> استفاده شد.</span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">با استفاده از روش های </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">PCR</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">، تعیین توالی و</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">روش هضم آنزیمی، کلونینگ ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> در پلاسمیدهای بیانی و انتقالی تایید شد. نتایج تعیین توالی ژن کدکننده </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> با سویه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">RH</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> ثبت شده در بانک جهانی ژن تشابه کامل داشت. هم چنین با استفاده از روش </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IFA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">، بیان ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> در سلول یوکاریوتیک </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">CHO</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> مورد تایید قرار گرفت.</span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">نتایج نشان داد که کلونینگ و ترانسفورم قطعه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ROP13</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">در پلاسمید </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;pcDNA3</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">با موفقیت انجام شده و در سلول یوکاریوت</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">CHO </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">&nbsp;بیان می شود. لذا از این پلاسمید نوترکیب می توان در مطالعات آتی به منظور واکسیناسیون و تشخیص عفونت می توان بهره برد.</span></span><br> <br> <br> &nbsp; <strong>Background and purpose:</strong> <em>Toxoplasma gondii (T. gondii)</em> is an obligatory intracellular protozoan parasite. Toxoplasmosis is highly prevalent and has a great effect on public health, therefor, there is a need for vaccine and sensitive diagnostic procedures. This study aimed at cloning and investigating the expression of ROP13 gene of <em>T. gondii.</em><br> <strong>Materials and methods:</strong> In this study, the gene was cloned in pTG19-T vector and transferred to a TOP10 strain of <em>E.coli</em> following ROP13 gene amplification using PCR. Then the ROP13 gene was sub cloned in expression plasmid pcDNA3. Also, pcROP13 was transferred to CHO cells and the expression level was evaluated by IFA method.<br> <strong>Results:</strong> Cloning and sub cloning of ROP 13 gene were confirmed by PCR, sequencing and enzymatic digestion. The gene sequencing showed complete homology with a recorded sequence in the gene bank. Moreover, the expression of ROP13 gene in CHO eukaryotic cells was confirmed by IFA method.<br> <strong>Conclusion:</strong> The results showed that ROP13 gene was successfully sub cloned into the pcDNA3 expression vector and expressed in CHO cells. Therefore, it can be used in the development of vaccines and in diagnostic tests.<br> <br> &nbsp; توکسوپلاسموزیس, Rhoptry 13, pcDNA3, بیان سلولی toxoplasmosis, Rhoptry 13, pcDNA3, gene expression 26 35 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1763-3&slc_lang=fa&sid=1 Paria Alizadeh پریا علیزاده 1003194753284600101562 1003194753284600101562 No Msc Student in Parasitology, Students Research Committee, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد انگل شناسی ، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Ahamd Daryani احمد دریانی 1003194753284600101563 1003194753284600101563 No Professor, Department of Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، گروه انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسموز، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ehsan Ahmadpour احسان احمدپور Ehsanahmadpour@gmail.com 1003194753284600101564 1003194753284600101564 Yes Assistant Professor, Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran استادیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Tohid Kazemi توحید کاظمی 1003194753284600101565 1003194753284600101565 No Associate Professor, Immunology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran دانشیار، گروه ایمنی شناسی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران. Adel Spotin عادل اسپوتین 1003194753284600101566 1003194753284600101566 No Assistant Professor, Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran استادیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Mahmoud Mahami-Oskoui محمود محامی اسکویی 1003194753284600101567 1003194753284600101567 No Associate Professor, Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran دانشیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Yaghob Azadi یعقوب آزادی 1003194753284600101568 1003194753284600101568 No Msc Student in Parasitology, Students Research Committee, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد انگل شناسی ، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Saba Rajabi صبا رجبی 1003194753284600101569 1003194753284600101569 No Msc Student in Parasitology, Students Research Committee, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد انگل شناسی ، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Dariush Shanehbandi داریوش شانه بندی 1003194753284600101570 1003194753284600101570 No Assistant Professor, Immunology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran استادیار، مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران.