fa آنالیز مولکولی ژن فون ویلیبرانت در بیماران فون ویلیبرانت تیپ یک با استفاده از تکنیک ژل الکتروفورز حساس به ساختار (CSGE): مقایسه دو روش دستی و ماشینی (فلورسانت) پژوهشي-کامل Research(Original) <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف:</span> بیماری فون ویلیبرانت تیپ یک، شایع ترین بیماری ارثی خونریزی دهنده ناشی از نقص در عملکرد ژن فون ویلیبرانت با طول 178000 نوکلئوتید می باشد. روش های مختلفی برای تعیین جهش در مطالعات ژنتیکی وجود دارد. در این مطالعه ابتدا روش دستگاهی ژل الکتروفورز حساس به ساختار (CSGE) با کمک رنگ های فلورسانت برای ژن فون ویلیبرانت طراحی و سپس قابلیت دو روش مختلف دستی و فلوئورسانت در تعیین جهش در این دو با هم مقایسه گردید.<br><span style="font-weight: bold">مواد و روش ها:</span> 52 اگزون و ناحیه های اتصال اگزون - اینترون و همچنین ناحیه 3' ژن فون ویلیبرانت در افراد شاخص از7 خانواده مبتلا به فون ویلیبرانت تیپ یک و یک مورد کنترل نرمال با استفاده از 56 PCR مختلف تکثیر گردید. قطعات PCR حاصل به منظور یافتن جهش با استفاده از هر دو روش دستی و فلوئورسانت بررسی شده و قطعات حاوی باند اطافه تعیین توالی شدند.<br><span style="font-weight: bold">یافته‌ها:</span> 125 مورد PCR با باندهای اضافه با استفاده از روش الکتروفورز فلورسانت (F-CSGE) در کل مشاهده شد در حالیکه 101 مورد توسط روش الکتروفورز دستی (M-CSGE) مشاهده گردید. 5 جهش نقطه ای توسط هر دو روش شناسایی گردید شامل 3 جهش جدید، گلابسین 19 به آرژنین (R19G) در اگزون 2؛ آرژنین 1315 به هیستیدین (R1315H ) در اگزون 28 و سیتوزین 2304 به لیزین (C2304Y) در اگزون 40 و دو جهش شناخته شده پرولین 1266 به لیزین (P1266L ) و سرین 1285 به پرولین (S1285P) در اگزون 28 می باشد. علاوه بر این، 45 پلی مورفیسم مختلف توسط روش F-CSGE و 39 پلی مورفیسم به وسیله روش M-CSGE در مجموع شناسایی گردید. 192 قطعه PCR در هر بار آزمایش توسط F-CSGE و حداکثر 40 نمونه در روش دستی بررسی و آنالیز گردید.<br><span style="font-weight: bold">استنتاج:</span> ی اگر چه F-CSGE روش وقت گیرتر و گرانتری نسبت به M-CSGE است اما روشی سریع، با حساسیت بیشتر و با ظرفیت بالاتری نسبت به M-CSGE برای تعیین جهش های ناشناخته در ژن VWF است. </div> <span style="font-weight: bold">Background and purpose:</span> Von Willebrand Disease (VWD) type 1, is the most common inherited bleeding disorder caused by defect in Von Willebrand Factor (VWF) gene with 178000 nucleotide length. Different methods are available to detect unknown mutations in a genetic study. The fluorescent conformation sensitive gel electrophoresis (F-CSGE) was designed for the VWF gene by using fluorescent dyes in this study and two methods of CSGE (manual and fluorescent) were compared to detect VWF gene mutations. <br><span style="font-weight: bold">Materials and methods </span>:The VWF gene in 7 index cases with type 1 VWD and one normal control were amplified using 52 exons, exon-intron boundaries and 3’ region of the gene using 56 different PCR. The PCR fragments were analyzed using both manual and fluorescent CSGE and the fragments with bandshifts were sequenced. <br><span style="font-weight: bold">Results :</span>In total, there were 125 PCR fragments with bandshift using F-CSGE and 101 fragments with bandshift using M-CSGE. Five different mutations were identified using both techniques including three new mutations, glycine 19 to argenine (G19R) in exon 2, Argenine 1315 to histidine (R1315H) in exon 28, cystin 2304 to lysine(C2304Y) in exon 40 and two known mutations,prolin 1266 to Lysine (P1266L) and Serine 1285 to Prolin (S1285P) in exon 28. In addition, 45 different polymorphisms were detected using F-CSGE and 39 were detected using M-CSGE. Also 192 different PCR fragments were analyzed in each run using F-CSGE and maximum 40 samples were analyzed using M-CSGE. <br><span style="font-weight: bold">Conclusion:</span>Although F-CSGE is more time consuming and more expensive than M-CSGE, but it is a rapid, more sensitive and high-throughput method to identify unknown mutations in VWF gene compared with M-CSGE. بیماری عروق کرونر، L،سلکتین، پلی مرفیسم ژنی Von Willebrand Disease, genetics, molecular analysis, mutations, CSGE 1 11 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-126&slc_lang=fa&sid=1 M.B Hashemi souteh سیدمحمدباقر هاشمی سوته 10031947532846006291 10031947532846006291 Yes A Godiu آن گودیو 10031947532846006292 10031947532846006292 No