fa بیان پروکاریوتی آنتی ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزای A (H5N1) بیوتکنولوژی Biotechnology گزارش کوتاه Brief Report &nbsp;<span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;"> و هدف:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">ویروس</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> آنفلوانزای</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">فوق حاد</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">پرندگان </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">A</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">(H5N1)</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> باعث ایجاد خسارات اقتصادی زیادی در سراسر جهان می شوند و ممکن است در</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">حیوانات درگردش باشد وتوانایی انتشار از انسان به انسان پیدا کند. بنابراین راه‌اندازی تست‌های تشخیصی برای کنترل عفونت آنفلوانزا ضروری است. مطالعات در مورد توالی اسیدهای آمینه پروتئین نورآمینیداز (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">) ویروس آنفلوانزا نشان داده است که </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> ایمنی زا</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">ترین پروتئین در حیوانات است و می‌تواند سیستم </span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">ایمنی هومورال را تحریک نماید.</span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"></span></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">ها:</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">در این مطالعه تجربی</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">ویروس آنفلوانزا (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">A/Indonesia/5/2005: H5N1</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">) در </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">pET21a</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> کلون و در میزبان (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">BL21</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">)</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E. coli </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">&nbsp;بیان شد. سپس میزان بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> از نظر متغیرهای غلظت القاگر </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">و </span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">زمان بهینه</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">سازی شد.</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">ها:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> نتایج، صحت ساختار </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Pet21a-NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> را نشان داد. باندهای ظاهرشده با وزن مولکولی موردانتظار </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">KDal)</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">38)</span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">روی </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> با وسترن بلات تایید شد که بیانی موفقیت</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">آمیز از پروتئین هدف درسویه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E. coli BL21</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"> بود. درتجزیه و تحلیل درون رایانه</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">ای، درستی اپی</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">توپ عمده در ساختار نسخه </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">تولید شده دراین مطالعه را نشان داد.</span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Koodak;">استنتاج:</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">NA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">نوترکیب جدید می</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">تواند به</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">طور مستقیم در آزمایشات سرولوژی برای تشخیص استفاده شود. همچنین می</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">تواند در معرض تهیه آنتی</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">‌</span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">بادی پلی کلونال قرارگیرد، که به عنوان ماده اساسی در تجزیه و تحلیل وسترن بلات و سایر مطالعات ایمونولوژیک مانند </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">ELISA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;">، ایمونوسیتوشیمی استفاده شده است.</span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:B Zar;"></span></span></span> <strong>&nbsp;Background and purpose:</strong> Highly Pathogenic Influenza A(H5N1) viruses cause vast economic losses throughout the world. They may circulate in animals and be able to spread from human to human. Therefore, launching diagnostic tests are highly essential to control the influenza infection. Studies on the amino acid sequence of the neuraminidase (NA) protein of influenza viruses revealed that NA is the most immunogenic protein in na&iuml;ve animals which can simply stimulate the humoral immune system well.<br> <strong>Materials and methods:</strong> Influenza virus NA gene (A/Indonesia/5/2005(H5N1) was cloned into pET21a and expressed in host <em>E. coli </em>(BL21) strains. Then, the expression level of NA protein was optimized for different IPTG inductor concentrations and times.<br> <strong>Results:</strong> Findings showed the integrity of pET21a-NA construct. Emerging bands with the expected molecular weight (38KDal) on SDS-PAGE and WB analysis confirmed the successful expression of target protein in <em>E.coli</em> BL21 strain. In silico analysis showed integrity of major epitopes in the structure of fused version of NA produced in this work.<br> <strong>Conclusion:</strong> The new recombinant NA has the potential to be used directly in serological tests.<br> It could be also used in polyclonal antibody preparation which is employed as an essential material<br> in western blot analyses and other immunological and serological studies, such as ELISA, immunocytochemistry, and immunohistochemistry.<br> &nbsp; نورآمینیداز, سیستم پروکاریوت, تست‌های تشخیصی, ویروس آنفلوانزای A ((H5N1 neuraminidase, prokaryote system, diagnostic tests, Influenza A (H5N1) virus 94 102 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-13629-1&slc_lang=fa&sid=1 Zahra Latif زهرا لطیف zahralatif91@gmail.com 1003194753284600130604 1003194753284600130604 No MSc in Molecular Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, Iran Department of Influenza Virus Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی مولکولی، پژوهشکده علوم وفناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران بخش آنفولانزا وسایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران Behrokh Farahmand بهرخ فرهمند farahmand.b2@gmail.com 1003194753284600130605 1003194753284600130605 Yes Assistant Professor, Department of Influenza Virus Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran استادیار، بخش آنفولانزا وسایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران Maryam Saleh مریم صالح marya@pasteur.ac.ir 1003194753284600130606 1003194753284600130606 No PhD in Medical Microbiology, Department of Influenza Virus Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دکتری میکروبیولوژی، بخش آنفولانزا وسایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران Zahra Barghi زهرا برقی Barghi.z@gmail.com 1003194753284600130607 1003194753284600130607 No MSc in Biochemistry, Department of Influenza Virus Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran کارشناسی ارشد بیوشیمی، بخش آنفولانزا وسایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران