fa ارزیابی کینتیکی آنزیم نیتریک اکسید سنتاز استخراج شده از کلیه گوسفند پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: نیتریک اکسید (NO) از طریق نیتریک اکسید سنتاز (NOS) و از ال- آرژینین تولید شده و در پروسه‌های فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی متعددی از سیستم‌های بیولوژیکی نقش دارد. در این بررسی، فعالیت‌های کینتیکی NOS جدا شده از کلیه گوسفند مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش‌ها: با استفاده از تکنیک‌های هموژنیزاسیون، رسوب توسط سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ستونی روی DEAE-32سلولز و'2، '5-ADP-آگاروز، آنزیم NOS از 500 گرم از بافت کلیه گوسفند، جدا و خالص‌سازی شد. در هر مرحله از روند خالص‌سازی این آنزیم، مقدار پروتئین و فعالیت آن با استفاده از روش‌های برادفورد و گریس بررسی شد. یافته‌ها: در این بررسی، وزن ملکولی NOS کلیه گوسفند در الکتروفورزSDS-PAGE، 54 کیلو دالتون بود. فعالیت ویژه، 6/0 واحد بر میلی گرم پروتئین و بازده خالص سازی آن نیز 9/0 درصد (خلوص نسبی 20 برابر) به دست آمد. pH و دمای اپتیم این آنزیم نیز به ترتیب 4/7 و 30 درجه سانتیگراد به دست آمد و انکوباسیون پروتئین نشان داد که در محدوده دمایی 10 تا 30 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه، آنزیم پایدار می باشد. در غلظت 75 میکرو مول از سوبسترای ال-آرژینین، بیشترین فعالیت NOS مشاهده شد. Vmax و Km آنزیم به ترتیب 250 نانو مول در دقیقه در میلی‌گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد. استنتاج: نزیم NOS از کلیه گوسفند با خلوص نسبی 20 برابر خالص سازی شد و دمای اپتیمم، pH، غلظت مناسب سوبسترا، Vmax و Km آن به ترتیب 30 درجه سانتیگراد، 4/7، 75 میکرومول، 250 نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد. Background and purpose: Nitric oxide (NO) is produced by nitric oxide synthase (NOS) from L-arginine and has an important role in a variety of physiological and pathological processes in biological systems. In this study, kinetic activities of isolated NOS were evaluated from sheep kidney. Materials and methods: In this reasearch homogenization, ammonium sulfate precipitation and column chromatography on DEAE-32 Cellulose and 2', 5'-ADP-agarose of 500 grams of sheep kidney were used to purify isolated nitric oxide. In all steps of purification process the amount of protein and its activity was assayed using Bradford and Griess reactions. Results: The molecular weight of sheep kidney on SDS-PAGE electrophoresis was 54 KD. Specific activity was 0.6 units/mg protein and recovery of purification was 0.9% (relative purity was 20 times more). Optimum temperature and pH were 30˚C and 7.4 and incubation of purified enzyme at thermal interval of 10 to 30˚C for 15 minute showed a stable enzyme activity. At 75 μM concentration of L-arginine substrate, the highest level of NOS activity was seen. The Vmax and Km of enzyme were 250 nmol/min/mg protein and 5.32 M, respectively. Conclusion: NOS enzyme from sheep kidney was purified with relative purity of 20 times and their optimum temperature, pH, suitable substrate concentration, Vmax and Km were 30˚C, 7.4, 75 μM, 250 nmol/min/mg proteins and 5.32 µmol, respectively. نیتریک اکسید سنتاز (NOS)، فعالیت کینتیکی، گوسفند،کلیه Nitric oxide synthase (NOS), kinetic activity, sheep, kidney 59 69 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1768-2&slc_lang=fa&sid=1 Manizheh Kadkhodaei Elyaderani منیژه کدخدایی الیادرانی 100319475328460026264 100319475328460026264 No Ali Mohammad Malek Askar علی محمد ملک عسکر 100319475328460026265 100319475328460026265 No Morad Rostami مراد رستمی morad_r56@yahoo.com 100319475328460026266 100319475328460026266 Yes Mohammad Aberomand محمد آبرومند 100319475328460026267 100319475328460026267 No Alireza Khirollah علیرضا خیراله 100319475328460026268 100319475328460026268 No