fa همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: باکتری‌های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می‌کنند که تیپ‌های A، B، E و F منجر به بوتولیسم در انسان می‌شوند. یکی از روش‌های درمانی بوتولیسم می‌تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده‌ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در وکتور بیانی pET28a همسانه‌سازی و در باکتری میزبان E. coli سویه BL21(DE3) بیان شده است. مواد و روش‌ها: به منظور همانندسازی ناحیه مورد نظر، DNA ژنومی باکتری استخراج گردید. با استفاده از واکنش PCR توالی مورد نظر تکثیر شد. سپس محصول PCR در وکتور pGEM-T Easy وارد و وکتور نوترکیب به سلول‌های میـزبان E. coli سویه DH5α منتقل گردید. سپس با واکنش الحاق محصول همسانه‌سازی شده از وکتور pGEM-T Easy به وکتور بیانی pET28a منتقـل شد. در نهایت پلاسمیـد نوترکیب pET28a به باکتـری E. coli سویه BL21(DE3) انتقال داده شد. بیان ناحیه کاتالیتیک در شرایط استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت. یافته ها: نتایج حاصل از برش آنزیمی و واکنش PCR بیانگر همانندسازی و زیر همانندسازی به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a بود. نتایج تعیین توالی نیز صحت حضور توالی مورد نظر را تأیید کرد. در نهایت بیان قطعه مورد مطالعه، با استفاده از ژل SDS-PAGE و آزمایش وسترن‌ بلات تأیید گردید. استنتاج: همسانه‌سازی توالی مورد مطالعه، به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a با صحت کامل انجام گرفت. همچنین نتایج بیان و تأیید محصول بیانی در باکتری E. coli BL21(DE3) بیانگر صحت بیان محصول مورد نظر بود. Background and purpose: Clostridium botulinum bacteria produces seven types of botulinum neurotoxins among which types A, B, E and F are responsible for human botulism. One of the treatments for botulism is the inhibition of botulinum neurotoxins catalytic domain activity by inhibitors. In this study, botulinum neurotoxin type E catalytic domain has been cloned in pET28a vector and expressed in E. coli BL21 (DE3). Materials and methods: In order to cloning of the catalytic domain, the genomic DNA was extracted. The sequence was amplified by Polymerase chain reaction (PCR) and was inserted into pGEM-T Easy vector. Then, the recombinant vector was transferred to E. coli DH5α cells. Afterwards, the cloning product was removed from pGEM-T Easy vector and inserted into pET28a vector using ligation reaction. Finally, the recombinant pET28a was transferred into E. coli BL21 (DE3) cells. Expression of catalytic domain was studied in standard conditions. Results: The results of enzymatic digestion and PCR reaction confirmed that cloning and subcloning occurred in pGEM-T Easy and pET28a vectors, respectively. The process was verified by sequencing. Finally, expression of this sequence was confirmed by the sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blot analysis. Conclusion: The cloning of the sequence was accurately conducted in pGEM-T Easy and pET28a vectors. Also, the results showed that the expression of this sequence has been performed properly. نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E, ناحیه کاتالیتیک, همسانه‌سازی, بیان Botulinum neurotoxin type E, catalytic domain, cloning, expression 148 157 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1768-5&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Rostami حسین رستمی E-mail: jmousavy@yahoo.com 100319475328460029560 100319475328460029560 No Seyed Jafar Moosavi سید جعفر موسوی E-mail: jmousavy@yahoo.com 100319475328460029561 100319475328460029561 Yes Firouz Ebrahimi فیروز ابراهیمی 100319475328460029562 100319475328460029562 No Abbas Hajizadeh عباس حاجی زاده 100319475328460029563 100319475328460029563 No