fa ارزیابی روش های مختلف استخراج DNA از کیست ژیاردیا لامبلیا انگل شناسي parasitology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: ژیاردیالامبلیا یکی از پاتوژن‌های تک یاخته‌ای مهم است که در طبقه‌بندی جزء تاژکدران روده‌ای قرار می‌گیرد ژیاردیازیس معمول‌ترین عفونت انگلی انسان در جهان است که باعث اسهال طولانی مدت می‌شود. هدف از این مطالعه مقایسه و ارزیابی 5 روش مختلف استخراج DNA از کیست ژیاردیالامبلیا به منظور تعیین روش مطلوب بود. مواد و روش‌ها: این مطالعه بر روی 30 نمونه مدفوع آلوده به انگل ژیاردیا صورت گرفت. تشخیص بیماری با تهیه گسترش مستقیم از نمونه مدفوع و رنگ آمیزی با لوگل بود.کیست‌های ژیاردیا به روش گرادیان سوکروز تخلیص شدند و 5 روش مختلف استخراج بر روی این نمونه‌ها صورت گرفت. که شامل: ذوب و انجماد + گلوله های شیشه‌ای+ کیت ((FGK، ذوب و انجماد +فنل کلروفرم ایزو امیل الکل PCI))، جوشاندن + فنل کلروفرم ایزو امیل الکل، سونیکاسیون + فنل کلروفرم ایزو امیل الکل و ذوب وانجماد + نمک با غلظت بالا (High salt) بود. سپس واکنش یک مرحله‌ای PCR بر روی DNA استخراج شده در ناحیه ژنی gdh انجام گرفت. یافته‌ها: بالاترین و کمترین میانگین نسبت جذب نوری DNAOD)) به ترتیب مربوط به روش استخراج FGK از مدفوع و روش ذوب وانجماد + غلظت بالا نمک (High salt) است. همچنین بالاترین و کمترین میانگین غلظت به ترتیب مربوط به روش ذوب و انجماد + PCI و روش FGK است همچنین پس از الکتروفورز محصول PCR با استفاده از روش استخراج FGK اسمیری در باندها مشاهده نشد. کم‌ترین زمان استخراج (2h>) مربوط به روش FGK بود. استنتاج: نتایج مطالعه حاضر نشان داد جهت رفع اشکالات استخراج DNA از کیست های ژیاردیا و کاهش زمان استخراج استفاده از گلوله‌های شیشه‌ای (Glass beads) و سپس کیت استخراج Accu prep (Bioneer) روشی مطلوب و دارای بیشترین کارآیی می‌باشد. Background and purpose: Giardia lamblia (G.lamblia) is one of flagellated protozoan pathogens. Giardiasis is the most common human parasite infection in the world, causing a lengthy course of diarrhea. The aim of the present study was to compare five different methods of DNA extraction from G.Lamblia cyst and determining the most efficient DNA extraction method. Materials and methods: This study was carried out in 30 human fecal samples with Giardia infection. To diagnose giardiasis wet mount from feces and staining with Lougol’s stain were performed. The cysts were purified and concentrated in a sucrose gradient. The isolated DNA from cysts was performed using different methods including freeze-thaw cycles, glass beads, and stool DNA extraction Kit (Accu prep) freeze-thaw cycles and Pheol-Cholorform-Isoamil alcohol (PCI) boiling and PCI sonication and PCI freeze-thaw and high salt. Then the gdh gene was amplified through single round PCR method. Results: The highest and lowest mean of OD were found in FGK and High salts, respectively. The highest and lowest means of concentration were seen in the freeze-thaw cycles and PCI and the FGK methods, respectively. Moreover, after using the FGK bands of PCR no smears were observed. Also, the lowest time of extraction was detected in FGK method. Conclusion: To remove problems of DNA extraction and decreasing the time of extraction, glass beads along with Accu prep stool DNA extraction Kit (Bioneer) could be suitable and the most efficient method. ژیاردیالامبلیا، نمونه‌های مدفوع، استخراج DNA، کیت استخراج PCR, Accuprep Giardia lamblia, fecal samples, DNA extraction, Accu prep stool DNA extraction Kit, PCR 67 74 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1256-58&slc_lang=fa&sid=1 Elham Kialashaki الهام کیا لاشکی 100319475328460025614 100319475328460025614 No Mahdi Sharif مهدی شریف 100319475328460025615 100319475328460025615 No Mahdi Fakhar مهدی فخار mahdif53@yahoo.com 100319475328460025616 100319475328460025616 Yes Ahmad Daryani احمد دریانی 100319475328460025617 100319475328460025617 No Abdol Sattar Paghe عبدالستار پقه 100319475328460025618 100319475328460025618 No