Journal of Mazandaran University of Medical Sciences

fa اهمیت روش استخراج بر محتوای پلی فنلی و فعالیت آنتی اکسیدانی بادرنجبویه و ارزیابی فعالیت آنتی هیپوکسی آن‌ها در موش سوری Impact of Extraction Methods on Polyphenol Contents and Antioxidant Activities of Melissa Officinalis and Evaluation of Their Antihypoxic Activities in Mice فارماکوگنوزی(تهیه دارو از منابع طبیعی) Pharmacognosy پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: نقش رادیکال‌های آزاد در ایجاد بسیاری از بیماری‌ها به خوبی اثبات شده است. این ذرات توانایی تخریب بیومولکول‌ها را دارند. آنتی‌اکسیدان‌ها می‌توانند مانع از این اثرات زیان آور شوند. نظر به این که گیاهان منبع آنتی‌اکسیدان‌های طبیعی می‌باشد تحقیقات در این زمینه رو به افزایش است. هیپوکسی به معنای کاهش اکسیژن موجود در بافت‌های بدن بوده که می‌تواند به اختلال در عملکرد بدن منجر شود. هیپوکسی موجب افزایش قابل ملاحظه ذرات فعال اکسیژن می‌گردد، پس آنتی‌اکسیدان‌ها به عنوان آنتی‌هیپوکسی مطرح می‌باشند. بادرنجبویه (Melissa officinalis L.) گیاه دارویی شناخته شده از خانواده Lamiaceae بوده که برای درمان بسیاری از بیماری‌ها از جمله قلبی عروقی و در مشکلات تنفسی و همچنین به عنوان تقویت‌کننده حافظه مورد استفاده می‌گیرد. این مطالعه به منظور بررسی تأثیر روش استخراج بر محتوای تام فنلی، فلاونوئیدی و فعالیت آنتی‌اکسیدانی این گیاه طراحی شده است. فعالیت آنتی هیپوکسی تمامی عصاره‌ها در سه مدل در موش بررسی شد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، اندام هوایی خشک شده بادرنجبویه به سه روش ماسیراسیون، با کمک سوکسله و با کمک امواج التراسونیک با حلال متانول عصاره‌گیری شدند. فعالیت آنتی اکسیدانی تمامی عصاره‌ها با روش بدام اندازی رادیکال آزاد DPPH و تست احیاکنندگی ارزیابی شد. محتوای تام فنلی و فلاونوئیدی تعیین گردید. اثر محافظتی عصاره‌ها در دوزهای اولیه mg/kg 250-5/62 در مقابل مرگ و میر ناشی از هیپوکسی در موش سوری با سه مدل خفگی، خونی و جریان خونی مورد ارزیابی قرارگرفت. زمان زنده ماندن موش‌ها به دقیقه اندازه‌گیری شد.کمیته اخلاق دانشگاه علوم پزشکی مازندران نیز پروتکل آزمایشی را تایید کرد. درتست هیپوکسی خفگی، فنی‌توئین (50 میلی‌گرم برکیلوگرم، داخل صفاقی) و در دو تست بعدی پروپرانولول (20 و 30 میلی‌گرم برکیلوگرم، داخل صفاقی) به‌عنوان کنترل مثبت به کار رفتند. در تمامی تست‌ها، نرمال سالین به‌عنوان کنترل منفی به‌کار گرفته شد.آنالیز واریانس یک سویه و متعاقب آن نیومن کولز با کمک نرم‌افزار گراف پد پریزم 8 به منظور تعیین اختلاف بین میانگین‌ها استفاده شد. یافته‌ها: برای استخراج ترکیبات پلی‌فنلی، روش خیساندن و عصاره‌گیری به روش التراسونیک(0/0001P<) و در تست بدام اندازی رادیکال آزاد DPPH عصاره‌های حاصل از روش سوکسله و خیساندن موثر از روش دیگر بودند. در تست قدرت احیا کنندگی، تمامی عصاره فعالیت بالایی از خود نشان دادند(0/05P>). در مدل خونی، هیچ‌یک از عصاره‌ها اثری از خود نشان ندادند. حتی عصاره حاصل از روش سوکسله در دوز mg/kg250، علی‌رغم این که زمان مرگ را حدود یک دقیقه افزایش داد، نتوانست تغییر معنی‌داری ایجاد کند(0/05P>). در مدل گردش خونی، هیچ‌یک از عصاره‌ها در پایین‌ترین دوز تست شده یعنی mg/kg 62/5 اثری از خود نشان نداند اما تمامی عصاره‌ها در دوزهای بالاتر اثر بسیار قوی از خود نشان دادند. تمامی عصاره‌ها در دوز mg/kg 250 اثری به مراتب قوی‌تر از پروپرانولول mg/kg 30 از خود نشان دادند. در مدل خفگی، تمامی عصاره‌ها اثرات بسیار خوبی از خود نشان دادند به گونه‌ای که بارها مجبور به کاهش دوز شدیم. عصاره حاصل از روش خیساندن در دوز mg/kg 1/95 و عصاره‌های حاصل از روش سوکسله و روش التراسونیک در دوز mg/kg 7/81اثری مشابه فنی‌توئین از خود نشان داد(0/05P>). استنتاج: باتوجه به نتایج این مطالعه مشخص شدکه روش استخراج تأثیر زیادی بر فعالیت آنتی‌اکسیدانی ومحتوای تام‌فنلی و فلاونوئیدی دارد. روش استخراج با کمک التراسونیک و روش خیساندن به ترتیب مناسب‌ترین روش‌ها برای استخراج ترکیبات فنلی و فلاونوئیدی از این گیاه بود. تمامی عصاره‌ها اثرات آنتی‌اکسیدانی بالایی نشان دادند. عصاره‌ها اثر بسیار خوبی در تست خفگی از خود نشان دادند Background and purpose: The role of free radicals in causing many diseases has been well proven. These particles can destroy biomolecules. Antioxidants can prevent these harmful effects. Considering that plants are a source of natural antioxidants, research in this field is increasing. Hypoxia means the reduction of oxygen in the body tissues, which can lead to dysfunction of the body. Hypoxia causes a significant increase in reactive oxygen species, thus, antioxidants are considered anti-hypoxia. Melissa officinalis L. is a well-known medicinal plant of Lamiaceae. Leaves of this plant have been widely used for the treatment of cardiovascular and respiratory problems and as a memory enhancer. This investigation was carried out to examine the impact of extraction on total phenolic contents and antioxidant activities of M. officinalis aerial parts. In addition, the Antihypoxic activities of all extracts were evaluated in three models in mice. Materials and methods: In this experimental study, dried aerial parts were extracted by three different methods, i.e. maceration method, ultrasonic-assisted, and soxhlet-assisted extraction. Antioxidative capacity was assessed by utilizing DPPH free radicals scavenging and reducing power. The total phenolic and flavonoid contents were also determined. The protective effects of extract in the initial dose of 62.5-250 mg/kg were evaluated against hypoxia-induced lethality in mice by three experimental models of hypoxia, i.e. asphyctic, haemic, and circulatory. The latencies for death for mice in minutes were recorded. The Institutional Animal Ethical Committee of Mazandaran University of Medical Sciences approved the experimental protocol. In the asphyctic hypoxic model, phenytoin (50 mg/kg, i.p.) and in the next two tests, propranolol (20 and 30 mg/kg, i.p.) were used as the positive control. In all tests, Normal saline (0.5 ml, i.p.) was used as the negative control. Analysis of variance was performed followed by Newman-Keuls multiple comparisons (by GraphPad Prism 8) were used to determine the differences in means. Results: Meceration method and ultrasonic(P<0.0001) assisted extraction were the best methods for extraction of polyphenols. In DPPH radical scavenging activity, soxhlet-assisted extraction and extraction by the meceration method were more efficient than ultrasonic-assisted extraction(P>0.05). In the hemic model, none of the extracts showed any activity. Even the soxhlet-assisted extract at the dose of 250 mg/kg, even though it increased the death time by about one minute, could not cause a significant effect(P>0.05). In the circulatory model, none of the extracts showed any effect at the lowest tested dose i.e. 62.5 mg/kg but all the extracts showed a very potent activity at higher doses. All the extracts at a dose of 250 mg/kg showed a much stronger effect than propranolol 30 mg/kg. In the asphyctic model, all the extracts showed very good effects so we had to reduce the dosage many times. The extract obtained from the maceration method at a dose of 1.95 mg/kg and ultrasonic-assisted and soxhlet assisted extracts at the dose of 7.81 mg/kg showed the same activity as phenytoin(P>0.05). Conclusion: The findings of the current study indicated that extraction methods significantly affect antioxidant capacities and total phenolic contents. The ultrasonic-assisted extraction and maceration method were the most suitable methods for extracting phenolic and flavonoid compounds from this plant. All extracts showed high antioxidant activities. All extracts showed very strong effects in the asphyctic model.   بادرنجبویه, روش استخراج, آنتی‌اکسیدان, آنتی هیپوکسی, هیپوکسی خفگی, هیپوکسی گردش خونی, هیپوکسی خونی Melissa officinalis, Extraction methods, Antioxidant, Antihypoxia, Asphyctic hypoxia, Circulatory hypoxia, haemic hypoxia 22 37 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-153-37&slc_lang=fa&sid=1 Ali Mirzazadeh علی میرزازاده Amirzazadeh74@gmail.com 1003194753284600166204 1003194753284600166204 No Pharmacy Student, Student Research Committee, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran and Faculty of Pharmacy, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی داروسازی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران و دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mohammad Hossein Hosseinzadeh محمد حسین حسین زاده iranmhhz@gmail.com 1003194753284600166205 1003194753284600166205 No PharmD, Pharmaceutical Sciences Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran. دکتر داروساز، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mohammad Eghbali محمد اقبالی mohammadeghbali1996@gmail.com 1003194753284600166206 1003194753284600166206 No PharmD, Pharmaceutical Sciences Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran. دکتر داروساز، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mohammad Ali Ebrahimzadeh محمد علی ابراهیم زاده zadeh20@gmail.com 1003194753284600166207 1003194753284600166207 Yes Faculty of Pharmacy, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran and Professor, Pharmaceutical Sciences Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران و استاد، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Omran Habibi عمران حبیبی emrapharm@yahoo.com 1003194753284600166208 1003194753284600166208 No Faculty of Pharmacy, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran and Associate Professor, Pharmaceutical Sciences Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران و دانشیار، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ahmad Ramezani احمد رمضانی ramezani_a5@yahoo.com 1003194753284600166209 1003194753284600166209 No Clinical Pharmacist, Faculty of Pharmacy, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran متخصص داروسازی بالینی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Amin Barani امین بارانی justallah2021@gmail.com 1003194753284600166210 1003194753284600166210 No Ph.D Student of Medicinal Chemistry, Faculty of Pharmacy, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دستیار شیمی دارویی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران