Journal of Mazandaran University of Medical Sciences

fa بررسی نقش محافظتی کوئرستین بر حیات سلول‌های نرمال تخمدان مواجه شده با داروی کلومیفن سیترات و ارتباط با بیان ژن p53 Evaluation of the Protective Effect of Quercetin on Normal Ovary Cells Viability Induce by Clomiphene Citrate and Correlation with p53 Gene Expression سم شناسی toxicology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: ناباروری، یکی از مشکلات عدیده پزشکی در دنیای امروز است. داروی کلومیفن سیترات برای درمان ناباروری استفاده می‌شود. از عوارض این دارو ایجاد بافت توموری در تخمدان می‌باشد. کوئرستین یک فلاونوئید است که به طور فراوان در طبیعت یافت می‌شود. کوئرستین در بسیاری از میوه‌ها، سبزیجات، برگ‌ها، دانه‌ها و غلات یافت می‌شود. کوئرستین، پتانسیل استفاده در درمان سرطان را دارد. شناخته‌شده‌ترین و شایع‌ترین ژن سرکوبگر تومور در انسان، ژن p53 است. ژن p53 در سال 1979 کشف شد و در سال 1989 به عنوان یک ژن مهارکننده تومور شناخته شد. این ژن در سال 1992 به دلیل نقشی که در حفظ ثبات ژنوم داشت به عنوان نگهبان ژنوم شناخته شد. ژن p53 متداول‌ترین ژن جهش یافته در سرطان‌های انسان است. این مطالعه با هدف بررسی نقش محافظتی کوئرستین بر حیات سلول‌های نرمال تخمدان مواجه شده با داروی کلومیفن سیترات و ارتباط با بیان ژن p53، انجام پذیرفت. مواد و روش‌ها: در این مطالعه آزمایشگاهی مداخله‌ای و از نوع کار تحقیقاتی از نوع کاربردی، از سلول‌های نرمال تخمدان رده‌ی سلولیCHO استفاده شد. غلظت‌های 1000، 500، 100، 50، 10 میلی‌گرم بر میلی‌لیترکوئرستین و 50 میکرومولار داروی کلومیفن سیترات و 29/0 میکروگرم بر میلی‌لیتر سیس پلاتین تهیه و به‌مدت 24 ساعت به سلول‌های کشت داده شده اضافه شد. در این مطالعه داروی کلومیفن سیترات و داروی سیس پلاتین هر دو به‌عنوان کنترل مثبت می‌باشند. ارزیابی حیات سلول‌ها به روش MTT assay انجام شد. ابتدا RNA استخراج و سپس بیان ژن p53 با دستگاه Real-Time PCR مورد بررسی و آنالیز قرار گرفت. در این مطالعه آغازگر مورد استفاده برای ژن p53 با استفاده از سایت‌های NCBI و primer3 طراحی شد. در این مطالعه ژن کنترل داخلی GAPDH می‌باشد. یافته‌ها: نتایج این مطالعه نشان داد که غلظت‌های 1000، 500، 100، 50 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر کوئرستین با کاهش سمیت داروی کلومیفن سیترات و داروی سیس پلاتین (هر دو به عنوان کنترل مثبت) باعث افزایش حیات سلولی می‌شود به‌طوری‌که هر چه غلظت کوئرستین بیش‌تر شد، تعداد سلول‌های زنده بیش‌تر می‌شود و در غلظت 1000 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر کوئرستین تعداد سلول‌های زنده به 83 درصد رسید. نتایج حاصل از آزمون Real-time PCR بیانگر آن است که، کوئرستین به‌طور معنی‌داری باعث افزایش بیان ژن p53 در مقایسه با گروه کنترل مثبت (داروی کلومیفن سیترات) و کنترل منفی شد (p<0/05). در غلظت‌های 500 (0/0020=P) و 1000 (p<0/0001) کوئرستین در مقایسه با داروی کلومیفن سیترات، این افزایش بیان چشمگیرتر بود. هم‌چنین در غلظت‌های 500 (p<0/0001) و1000 (p<0/0001) کوئرستین در مقایسه با کنترل منفی، افزایش بیان چشمگیری در ژن p53 مشاهده شد. استنتاج: یافته‌های حاصل از این بررسی نشان داد که، کوئرستین احتمالا باعث مهار سمیت سلولی حاصل از داروی کلومیفن سیترات و افزایش میزان بیان ژن p53 می‌شود و میزان اثربخشی آن وابسته به دوز می‌باشد. ‌بنابراین مطالعه حاضر تا حدی می‌تواند بیان‌کننده نقش کوئرستین در فرآیند مهار تومورزایی در گسترش سرطان در سلو‌ل‌های نرمال تخمدان باشد.   Background and purpose: Infertility is one of the medical problems in the world today. Clomiphene citrate drug is used to treat infertility. One of the side effects of this drug is the formation of tumor tissue in the ovary. Quercetin is a flavonoid found abundantly in nature. Quercetin is found in many fruits, vegetables, leaves, seeds, and grains. Quercetin has the potential to be used in the treatment of cancer. The most well-known and common tumor suppressor gene in humans is the p53 gene. The p53 gene was discovered in 1979 and recognized as a tumor suppressor gene in 1989. This gene was recognized as the guardian of the genome in 1992 due to its role in maintaining the stability of the genome. The p53 gene is the most commonly mutated in human cancers. The purpose of this study is to evaluate the protective effect of quercetin on normal ovary cell viability induced by clomiphene citrate drug and its correlation with p53 gene expression. Materials and methods: In this research, Normal ovarian cells of the CHO cell line were used. Concentrations of 10, 50, 100, 500, and 1000 mg/ml quercetin 50 μM clomiphene citrate drug and 0.29 μg/ml cisplatin were prepared and added to the cultured cells for 24 hours. In this study, Clomiphene Citrate and Cisplatin are both positive controls. Cell viability was evaluated by MTT assay. RNA was extracted and p53 gene expression was analyzed by Real-Time PCR. In this study, the primer used for the p53 gene was designed using NCBI and primer3 sites. In this study, the internal control gene is GAPDH. Results: Results showed that the concentrations of 50, 100, 500, and 1000 mg/ml of quercetin reduced the toxicity of clomiphene citrate drug and cisplatin (both positive controls). So the higher quercetin concentration leads to a higher number of living cells and at 1000 mg/ml quercetin the number of living cells reached 83%. The results of Real-time PCR showed that Quercetin significantly increased the expression of the p53 gene compared to the positive control group (clomiphene citrate) and negative control (P<0.05). In the concentrations of 500 (P=0.0020) and 1000 (P<0.0001) quercetin compared to clomiphene citrate, this expression increase was more significant. Also, in the concentrations of 500 (P<0.0001) and 1000 (P<0.0001) quercetin compared to the negative control, a substantial increase in p53 gene expression was observed. Conclusion: The findings of this study showed that the use of quercetin inhibits the cytotoxicity of clomiphene citrate and increases the expression of the p53 gene, and its effectiveness is dose-dependent. However, Our study may partially explain the role of quercetin in the tumorigenesis process in the development of cancer in normal ovarian cells.   سلول نرمال تخمدان, کلومیفن سیترات, فلاونوئید, کوئرستین, سیس پلاتین, ژن p53, تومورزایی Normal ovarian cell, Clomiphene citrate, Flavonoid, Quercetin, Cisplatin, p53 gene, tumorigenesis 48 60 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-17613-1&slc_lang=fa&sid=1 Amirhossein Azari امیرحسین آذری amirhoseinazari33@yahoo.com 1003194753284600169430 1003194753284600169430 No MSc, Department of Genetics, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Sciences,Islamic Azad University, Tehran, Iran کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک، دانشکده علوم و فناوری های نوین، علوم پزشکی تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Maryam Eslami مریم اسلامی Drmaryam.eslami2020@gmail.com 1003194753284600169431 1003194753284600169431 No Applied Biotechnology Research Center, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran مرکز تحقیقات زیست فناوری کاربردی، علوم پزشکی تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Abbas Mohammadpour عباس محمدپور abbasbiology@yahoo.com 1003194753284600169432 1003194753284600169432 No PhD in Cell and Molecular Biology, Pharmaceutical Sciences Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دکتری تخصصی سلولی و مولکولی، دانشکده داروسازی، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mohammad Shokrzadeh محمد شکرزاده mslamuki@gmail.com 1003194753284600169433 1003194753284600169433 Yes Professor, Pharmaceutical Research Center, Department of Toxicology and Pharmacology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، مرکز تحقیقات دارویی، گروه سم شناسی و فارماکولوژی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران