Journal of Mazandaran University of Medical Sciences

fa مهار همزمان PD-L1 و AXL: یک رویکرد نوین در ایمونوتراپی سرطان تخمدان Dual Blockade of PD-L1 and AXL in SKOV3 Cell Line: A Novel Strategy for Immunotherapy in Ovarian Cancer ايمونولوژي Immunology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: سرطان تخمدان به عنوان یکی از کشنده‌ترین بدخیمی‌های زنان شناخته می‌شود که به دلیل مقاومت دارویی و نرخ بالای عود بیماری، درمان آن با چالش‌های متعددی همراه است. این مطالعه با هدف بررسی اثرات مهار همزمان دو مسیر سیگنالینگ PD-L1 (درگیر در فرار ایمنی) و AXL (یکی از عوامل دخیل در متاستاز و تهاجم تومور) در رده سلولی سرطان تخمدان SKOV3 انجام پذیرفت. مواد و روش ‌ها: در این مطالعه آزمایشگاهی از نوع تجربی، سلول‌های SKOV3 در محیط کشت DMEM حاوی 10 درصد FBS و آنتی‌بیوتیک کشت داده شدند. ابتدا سطوح بیان پایه ژن‌های PD-L1، AXL و مارکرهای EMT (شامل Vimentin، TGF-β و MMP-9) با استفاده از تکنیک Real-time PCR ارزیابی گردید. بهینه ‌سازی شرایط برای مهار  PD-L1 با siRNA اختصاصی (10 نانومولار، 48 ساعت) و مهار AXL با مهار کننده اختصاصی R428 (با تعیین IC50 برابر 9/2 میکرومولار در 48 ساعت) انجام پذیرفت. گروه‌های آزمایش شامل شاهد منفی، مهار منفرد هر مسیر و درمان ترکیبی بودند. ارزیابی زیست‌پذیری سلولی با آزمون MTT و تغییرات بیان ژن‌های هدف با تکنیک Real-time PCR بررسی شد. یافته‌ها: آنالیزهای اولیه، میزان بیان پایه ای از ژنهای AXL ، Vimentin، PD-L1، TGF-β و MMP-9 را در این رده سلولی نشان داد. تیمار منفرد با siRNA ضد PD-L1 یا R428 به‌طور معنی‌داری موجب کاهش تکثیر سلولی گردید (0/0007< P). با این حال، درمان ترکیبی، اثر سینرژیستی قابل توجهی در مهار رشد سلولی نشان داد (0/0001< P). هم‌چنین این روش منجر به کاهش معنی‌دار بیان ژن‌های PD-L1، Vimentin، TGF-β و MMP-9 گردید (0/0001< P) که نشان‌ دهنده مهار مؤثر مسیرهای EMT و متاستاز می‌باشد. استنتاج: استراتژی مهار همزمان مسیرهای PD-L1 و AXL می‌تواند به عنوان یک رویکرد درمانی نوید بخش در مدیریت سرطان تخمدان مقاوم به درمان مطرح باشد. با این حال، مطالعات تکمیلی در مدل‌های پیش ‌بالینی و ارزیابی‌های ایمونولوژیک گسترده‌تر ضروری به نظر می‌رسد.   Background and purpose: Ovarian cancer stands out as one of the most lethal forms of gynecological malignancy, marked by elevated mortality rates primarily due to its frequent late-stage diagnosis and the development of therapeutic resistance. This investigation sought to examine a novel combinatorial approach that targets both PD-L1-mediated immune evasion and AXL-driven epithelial–mesenchymal transition (EMT) in SKOV3 ovarian cancer cells. Materials and methods: For therapeutic intervention, PD-L1 was silenced using sequence-specific siRNA (10 nM; 48-hour transfection), while AXL signaling was inhibited using the selective small-molecule inhibitor R428 (IC₅₀ = 2.9 μM at 48 hours). Experimental groups included scramble siRNA, PD-L1 siRNA, scramble siRNA combined with R428, PD-L1 siRNA combined with R428, R428 monotherapy, and untreated controls. Cell viability was assessed using the MTT assay, and gene expression levels were quantified by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Results: This investigation demonstrated that SKOV3 cells intrinsically exhibit basal expression of AXL, Vimentin, PD-L1, TGF-β, and MMP-9, indicating a baseline metastatic potential and an inherent capacity for immune evasion. Both single agents (PD-L1 siRNA and R428) exhibited significant anti-proliferative activity (P < 0.0007 and P < 0.0005, respectively). Importantly, their combination revealed a synergistic effect, resulting in significantly greater growth inhibition (P < 0.0001). Gene expression analysis confirmed marked downregulation of PD-L1 (P < 0.0001) and multiple EMT markers following combination treatment, evidenced by a 72% reduction in vimentin, 65% in TGF-β, and 58% in MMP-9 compared to controls. Conclusion: The findings showed that simultaneous inhibition of the PD-L1 and AXL pathways substantially suppresses cancer progression, resulting in a significant downregulation of EMT-regulating genes.   سرطان تخمدان, ایمونوتراپی ترکیبی, siRNA ضد PD-L1, گیرنده‌ تیروزین کینازی Axl Ovarian Cancer, Combinational Immunotherapy, PD-L1 siRNA, Axl Receptor Tyrosine Kinase. 15 29 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-18716-1&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Rahavi حسین رهاوی 1003194753284600183354 1003194753284600183354 No Ph.D. Candidate in Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری تخصصی ایمنی‌شناسی پزشکی، گروه ایمنی‌شناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ahmad Najafi احمد نجفی 1003194753284600183355 1003194753284600183355 No Ph.D. in Immunology, SABA Biomedicals Knowledge-Enterprise Co, Tehran, Iran. دکتری تخصصی ایمنی‌شناسی پزشکی، شرکت دانش بنیان سلول بافت آزما، تهران، ایران Hossein Asgarian-omran حسین عسگریان عمران 1003194753284600183356 1003194753284600183356 No Professor, Department of Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، گروه ایمنی‌شناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Behrouz Aflatoonian بهروز افلاطونیان 1003194753284600183357 1003194753284600183357 No Associate Professor, Stem Cell Biology Research Center, Yazd Reproductive Sciences Institute, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran دانشیار، بیولوژی تولید مثل، مرکز تحقیقات بیولوژی سلول های بنیادی، پژوهشکده علوم تولید مثل ، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد ، یزد، ایران Mohsen Tehrani محسن طهرانی 1003194753284600183358 1003194753284600183358 No Professor, Department of Immunology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، گروه ایمنی‌شناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ehsan Farashahi Yazd احسان فراشاهی یزد 1003194753284600183359 1003194753284600183359 Yes Associate Professor, Genetics, Stem Cell Biology Research Center, Institute of Reproductive Sciences, Shahid Sadoughi Yazd University of Medical Sciences, Yazd, Iran دانشیار، ژنتیک، مرکز تحقیقات بیولوژی سلول‌های بنیادی، پژوهشکده علوم تولید مثل ، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد، یزد، ایران