fa کلونینگ و توالی‌یابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم 14 سویه RH توکسوپلاسما گوندیی انگل شناسي parasitology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: بیماری توکسوپلاسموز از بیماری‌های شایع در جهان می‌باشد که حدود یک سوم مردم دارای آنتی‌بادی بر علیه توکسوپلاسما هستند. این بیماری بیشتر به دلیل عوارض وخیم آن، در موارد مادرزادی و نیز بیماران نقص سیستم ایمنی اهمیت دارد. ژن کد کننده پروتئین 14GRA می‌تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت DNA (Deoxyribonucleic acid) واکسن و همچنین طراحی کیت تشخیصی مورد ارزیابی قرار گیرد. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین 14GRA سویه RH توکسوپلاسما گوندیی بود. مواد و روش‌ها: در مرحله اول پس از جداسازی تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما از مایع صفاقی موش آلوده، DNA آن استخراج شد و پس از انجام PCR (Polymerase chain reaction)، محصول تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. سپس ژن حاصل در وکتور pTG19-T کلون گردید. جهت تأیید از روش‌های Colony-PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم‌های محدود کننده HindIII و EcoRI استفاده شد. در نهایت ژن 14GRA کلون شده در وکتور pTG19-T مورد تعیین توالی قرار گرفت. یافته‌ها: بررسی واکنش PCR بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین 14GRA نشان داد که این ژن 1227 جفت بازی با ژن 14GRA سویه RH ثبت شده در ژن بانک تشابه کامل داشت. علاوه بر این، با استفاده از روش‌های هضم آنزیمی و Colony PCR کلون شدن، ژن 14GRA در پلاسمید pTG19-T مورد تأیید قرار گرفت. استنتاج: ژن 14GRA به طور موفقیت‌آمیزی در پلاسمید pTG19-T کلون شد و این پلاسمید می‌تواند برای مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن DNA و طراحی کیت تشخیصی مورد استفاده قرار گیرد. Background and purpose: Toxoplasmosis is a common parasitic disease throughout the world and ‎one-third of the population has antibodies to Toxoplasma gondii. This disease causes serious medical ‎problems in fetuses and immunocompromised individuals. As gene encoding protein GRA14 can be ‎considered as a suitable target for DNA vaccine and designing diagnostic kits the aim of this study was to do ‎cloning and sequencing the gene encoding GRA14 protein of Toxoplasma gondii RH strain.‎ Materials and methods: DNA extraction was performed on harvested tachyzoites from mouse ‎peritoneal fluid, then PCR carried out and amplification products were analyzed by gel electrophoresis. ‎GRA14 gene was cloned in pTG19-T as a cloning vector, then recombinant plasmid confirmed by the colony-‎PCR and restriction enzyme digestion using HindIII and EcoRI, followed by sequencing.‎ Results: Evaluation of PCR products by agarose gel electrophoresis and analysis of nucleotide ‎sequencing of 1227 bp gene encoding the protein GRA14, revealed the complete homology with the recorded ‎sequences in the gene bank. Furthermore, cloning of GRA14 gene in pTG19-T vector was confirmed with ‎colony PCR and restriction enzyme digestion.‎ Conclusion: The results showed that the GRA14 gene was successfully cloned into the pTG19-T ‎vector and this plasmid can be used to design DNA vaccines and diagnostic kits in further studies.‎ توکسوپلاسما گوندیی, 14GRA, کلونینگ Toxoplasma gondii, Dense granule antigen 14, Cloning‎ 42 49 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1633-1&slc_lang=fa&sid=1 Ehsan Ahmadpour احسان احمدپور 100319475328460036736 100319475328460036736 No علوم پزشکی مازندران Shahabeddin Sarvi شهاب الدین سروی shahabesarvi@yahoo.com 100319475328460036737 100319475328460036737 Yes علوم پزشکی مازندران Ahmad Daryani احمد دریانی 100319475328460036738 100319475328460036738 No علوم پزشکی مازندران Mehdi Sharif مهدی شریف 100319475328460036739 100319475328460036739 No علوم پزشکی مازندران Mohammad-Bagher Hashemi Souteh محمد باقر هاشمی 100319475328460036740 100319475328460036740 No علوم پزشکی مازندران Azadeh Mizani آزاده میزانی 100319475328460036741 100319475328460036741 No علوم پزشکی مازندران Kian Rezaee کیان رضایی 100319475328460036742 100319475328460036742 No علوم پزشکی مازندران