Journal of Mazandaran University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران
J Mazandaran Univ Med Sci
Medical Sciences
http://jmums.mazums.ac.ir
1
admin
1735-9260
1735-9279
fa
jalali
1393
2
1
gregorian
2014
5
1
24
112
online
1
fulltext
fa
کلونینگ و توالییابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم 14 سویه RH توکسوپلاسما گوندیی
Cloning and sequencing the plasmid encoding dense granule antigen 14 (GRA14) of Toxoplasma gondii RH strain
انگل شناسي
parasitology
پژوهشي-کامل
Research(Original)
سابقه و هدف: بیماری توکسوپلاسموز از بیماریهای شایع در جهان میباشد که حدود یک سوم مردم دارای آنتیبادی بر علیه توکسوپلاسما هستند. این بیماری بیشتر به دلیل عوارض وخیم آن، در موارد مادرزادی و نیز بیماران نقص سیستم ایمنی اهمیت دارد. ژن کد کننده پروتئین 14GRA میتواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت DNA (Deoxyribonucleic acid) واکسن و همچنین طراحی کیت تشخیصی مورد ارزیابی قرار گیرد. هدف از این بررسی، شناسایی و کلون کردن ژن کد کننده پروتئین 14GRA سویه RH توکسوپلاسما گوندیی بود.
مواد و روشها: در مرحله اول پس از جداسازی تاکیزوئیتهای توکسوپلاسما از مایع صفاقی موش آلوده، DNA آن استخراج شد و پس از انجام PCR (Polymerase chain reaction)، محصول تکثیر شده بر روی ژل الکتروفورز بررسی گردید. سپس ژن حاصل در وکتور pTG19-T کلون گردید. جهت تأیید از روشهای Colony-PCR و هضم آنزیمی به وسیله آنزیمهای محدود کننده HindIII و EcoRI استفاده شد. در نهایت ژن 14GRA کلون شده در وکتور pTG19-T مورد تعیین توالی قرار گرفت.
یافتهها: بررسی واکنش PCR بر روی ژل الکتروفورز و همچنین تعیین توالی ژن کد کننده پروتئین 14GRA نشان داد که این ژن 1227 جفت بازی با ژن 14GRA سویه RH ثبت شده در ژن بانک تشابه کامل داشت. علاوه بر این، با استفاده از روشهای هضم آنزیمی و Colony PCR کلون شدن، ژن 14GRA در پلاسمید pTG19-T مورد تأیید قرار گرفت.
استنتاج: ژن 14GRA به طور موفقیتآمیزی در پلاسمید pTG19-T کلون شد و این پلاسمید میتواند برای مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن DNA و طراحی کیت تشخیصی مورد استفاده قرار گیرد.
Background and purpose: Toxoplasmosis is a common parasitic disease throughout the world and one-third of the population has antibodies to Toxoplasma gondii. This disease causes serious medical problems in fetuses and immunocompromised individuals. As gene encoding protein GRA14 can be considered as a suitable target for DNA vaccine and designing diagnostic kits the aim of this study was to do cloning and sequencing the gene encoding GRA14 protein of Toxoplasma gondii RH strain.
Materials and methods: DNA extraction was performed on harvested tachyzoites from mouse peritoneal fluid, then PCR carried out and amplification products were analyzed by gel electrophoresis. GRA14 gene was cloned in pTG19-T as a cloning vector, then recombinant plasmid confirmed by the colony-PCR and restriction enzyme digestion using HindIII and EcoRI, followed by sequencing.
Results: Evaluation of PCR products by agarose gel electrophoresis and analysis of nucleotide sequencing of 1227 bp gene encoding the protein GRA14, revealed the complete homology with the recorded sequences in the gene bank. Furthermore, cloning of GRA14 gene in pTG19-T vector was confirmed with colony PCR and restriction enzyme digestion.
Conclusion: The results showed that the GRA14 gene was successfully cloned into the pTG19-T vector and this plasmid can be used to design DNA vaccines and diagnostic kits in further studies.
توکسوپلاسما گوندیی, 14GRA, کلونینگ
Toxoplasma gondii, Dense granule antigen 14, Cloning
42
49
http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1633-1&slc_lang=fa&sid=1
Ehsan
Ahmadpour
احسان
احمدپور
100319475328460036736
100319475328460036736
No
علوم پزشکی مازندران
Shahabeddin
Sarvi
شهاب الدین
سروی
shahabesarvi@yahoo.com
100319475328460036737
100319475328460036737
Yes
علوم پزشکی مازندران
Ahmad
Daryani
احمد
دریانی
100319475328460036738
100319475328460036738
No
علوم پزشکی مازندران
Mehdi
Sharif
مهدی
شریف
100319475328460036739
100319475328460036739
No
علوم پزشکی مازندران
Mohammad-Bagher
Hashemi Souteh
محمد باقر
هاشمی
100319475328460036740
100319475328460036740
No
علوم پزشکی مازندران
Azadeh
Mizani
آزاده
میزانی
100319475328460036741
100319475328460036741
No
علوم پزشکی مازندران
Kian
Rezaee
کیان
رضایی
100319475328460036742
100319475328460036742
No
علوم پزشکی مازندران