fa طراحی و ساخت کلون بیان کننده داروی ضد انعقادی دسیرودین (هیرودین) به شکل خارج سلولی در اشرشیا کلی بیوتکنولوژی Biotechnology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: هیرودین پلی پپتیدی با 65 تا 66 اسید آمینه است که به عنوان داروی ضدانعقادی، از غدد بزاقی زالو ترشح می‌شود. این دارو، مهارکننده بسیار قوی ترومبین می‌باشد بنابراین می‌تواند رقیبی برای هپارین نیز باشد. هدف از این مطالعه، الحاق توالی سیگنال پپتید pelB (توالی سیگنال پپتید pelB روی سکانس پلاسمید pET-22b تعبیه شده است) و بررسی بیان پروتئین نوترکیب هیرودین در اشرشیاکلی می‌باشد. مواد و روش‌ها: ترادف 66 آمینواسیدی واریانت HV3 ژن هیرودین تهیه و به داخل یک وکتور بیانی قوی (pET-22b) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از His-tag در ناحیه N-ترمینال ژن استفاده گردید. سیگنال پپتید pelB در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و ساختار پلاسمیدی حاصله توسط سویه OrigamiB (DE3) باکتری E.coli بیان شد. در نهایت میزان بیان پروتئین تولیدی در ناحیه سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت مقایسه گردید. یافته‌ها: نتایج به‌دست آمده نشان می‌دهد که مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمیک بیان شده و مقدار کمی پروتئین نیز به محیط کشت ترشح گردیده است. استنتاج: با به کارگرفتن وکتورهایی که قادر به انتقال پروتئین هدف به فضای پری پلاسمیک، که محیطی بسیار مطلوب برای شکل‌گیری باندهای دی سولفید و فلدینگ صحیح پروتئین هدف هستند، احتمال تشکیل اینکلوژن بادی‌ها کاهش یافته و تولید پروتئین‌های محلول و فعال افزایش می‌یابد. Background and purpose: Hirudin is a 65-66 amino acids polypeptide which is secreted as an anticoagulant compound from salivary glands of medical leech. This drug is a very potent inhibitor of thrombin and is so effective for arterial and venous thrombosis prevention. Therefore, it can compete with heparin. The aim of this study was to add a pelB signal peptide to pET-22b plasmid and to investigate the expression of recombinant hirudin in E.coli. Materials and methods: At first, the 66 nucleotic sequence of hirudin's gene was obtained and entered to a powerful vector (pET-22b). N_terminal His-tag was used for protein purification. We inserted pelB signal sequence at the begining of the gene to secrete protein to periplasmic region and culture medium. The expression of the target protein by origami (DE3) strain was then measured. Finally, the target protein was measured in periplasmic region, cytoplasm and culture medium. Results: The results showed that more protein was expressed in the periplasmic space and a small amount of protein secreted into the culture medium. Conclusion: Using the vectors capable of transferring the proteins to the periplasmic region, that is very favorable space for the formation of disulfide bonds and properly folding of the target protein, could decrease the production of inclusion bodies and increase the production of soluble and active proteins سیگنال پپتید pelB, هیرودین, دسیرودین, ضد انعقادی, پری پلاسمیک pelB signal sequence, hirudin, desirudin, anticoagulant, periplasmic 72 82 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4333-2&slc_lang=fa&sid=1 Sahar Sabaghzadeh سحر صباغ زاده 100319475328460043481 100319475328460043481 No MSc in Cellular and Molecular Biology, Department of Biology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University,Tehran, Iran علوم پزشکی مازندران Hasan Mirzahoseini حسن میرزاحسینی mirzahoseini@pasteur.ac.ir 100319475328460043482 100319475328460043482 Yes Assistant Professor, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran علوم پزشکی مازندران Delavar Shahbazzadeh دلاور شهباز زاده 100319475328460043483 100319475328460043483 No Assistant Professor, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran علوم پزشکی مازندران Tahereh Naji طاهره ناجی 100319475328460043484 100319475328460043484 No Assistant Professor, Department of Biology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University,Tehran, Iran علوم پزشکی مازندران