fa انتخاب اختصاصی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی به کمک پروتئین A در تکنیک کتابخانه آنتی‌بادی فاژ ايمونولوژي Immunology پژوهشي-کامل Research(Original) <div align="right" style="direction: rtl"> سابقه و هدف: تکنیک کتابخانه آنتی‌بادی فاژ یکی از قدرتمندترین روش‌های ساخت قطعات آنتی‌بادی در محیط آزمایشگاه است. با این حال یکی از مشکلات تکنیکی در مسیر انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی و عملکردی وجود فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی در کتابخانه آنتی‌بادی فاژ است. هدف از این مطالعه استفاده از قابلیت اتصال کلون‌های موجود در کتابخانه آنتی‌بادی فاژ به پروتئین A برای خالص‌سازی فیزیکی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی از فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی است. مواد و روش‌ها: کتابخانه آنتی‌بادی فاژ Tomlinson طبق پروتکل مربوطه تکثیر شد. انتخاب آنتی‌بادی علیه گیرنده HER2 در سطح سلول VERO انجام شد. سه چرخه panning در دو گروه صورت گرفت به صورتی که در یک گروه قبل از هر چرخه panning فاژهای تولید شده به‌وسیله پروتئین A متصل به آگاروز خالص‌سازی شدند، در حالی که در گروه کنترل مرحله خالص‌سازی با پروتئین A صورت نگرفت. آنتی‌بادی‌های به دست آمده در انتهای هر چرخه در دو گروه مورد مطالعه به‌وسیله PCR و phage-ELISA مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج آزمون PCR نشان‌دهنده افزایش قابل‌ملاحظه تعداد فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی پس از خالص‌سازی توسط پروتئین A در انتهای چرخه سوم panning (87 درصد) نسبت به گروه کنترل (41 درصد) است. بعلاوه نتایج آزمون الیزا نیز تأیید انتخاب و تکثیر اختصاصی آنتی‌بادی در گروه فاژ خالص شده با پروتئین A است. استنتاج: این مطالعه اهمیت خالص‌سازی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی را برای تولید و انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی را در تکنیک کتابخانه آنتی‌بادی فاژ نشان می‌دهد. </div> Background and purpose: Antibody phage display library is a powerful in vitro technology for production of recombinant antibody fragments against a wide variety of antigens. However, the presence of insert-free clones in the phage libraries limited the specific enrichment of antibody fragments in many studies. The aim of this study was to protein A-aided recovery of insert-containing phages in antibody phage display library. Materials and Methods: Tomlinson antibody library was prepared according to the standard protocol. Three rounds of panning were performed in two independent groups on VERO/HER2 cells, considering a step of protein A-aided phage precipitation at the end of each round only in one group. The efficiency of this method was evaluated on the selected clones using PCR and phage-Elisa. Results: The results of PCR showed that 87% of clones contained insert after three rounds of panning using protein A-recovered phages while in the control group only 41% of clones contained insert. Also, the results of phage-ELISA showed specific enrichment of anti-HER2 antibodies in protein A-treated group. Conclusion: This method provided a simple and effective way for selective enrichment of antibody fragments in the phage display antibody libraries. کتابخانه آنتی‌بادی فاژ, پروتئین A, HER2, فاژ فاقد قطعه آنتی‌بادی Antibody phage display library, protein A, HER2, Insert-free phage 43 53 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4374-5&slc_lang=fa&sid=1 reza valadan رضا ولدان 100319475328460043621 100319475328460043621 No Institute of Biotechnology, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad پژوهشکده زیست فن آوری، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد Alireza Rafiei علیرضا رفیعی rafiei1710@gmail.com 100319475328460043622 100319475328460043622 Yes Molecular and Cell Biology Research Center, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری Gholamreza Hashemitabr غلامرضا هاشمی تبار 100319475328460043623 100319475328460043623 No Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد Mohammad reza Bassami محمدرضا باسامی 100319475328460043624 100319475328460043624 No Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد