fa استفاده از روش Fast PCR جهت تشخیص گونه های فاسیولا انگل شناسي parasitology پژوهشي-کامل Research(Original) سابقه و هدف: انگل‌های شایع کبدی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا از عوامل ایجادکننده فاسیولایازیس بوده، که بیماری جهانی و شایع در انسان و دام می‌باشد. در مطالعه حاضر ما یک روش سریع، آسان و در عین حال دقیق را با استفاده از متد PCR Fast جهت تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا معرفی نمودیم. مواد و روش‌ها: 30 ایزوله فاسیولا ی بالغ از کبد گاو و گوسفند از کشتارگاه‌های استان مازندران جدا گردید. ناحیه ژنی ITS1 با استفاده از پره میکس های Amp® Fast PCR، در مقایسه با یکی از پره میکس‌های متداول موجود در بازار (AccuPower® Taq PCR PreMix شرکت Bioneer) تکثیر شدند. به علاوه پروفایل PCR-RFLP جهت تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از آنزیم اندونوکلئازی TasI (Tsp509I) انجام گرفت. یافته‌ها: باندی با وزن تقریبی 463 جفت باز برای تمامی نمونه‌های فاسیولا با استفاده از پره میکس Sapphire Amp® Fast PCR فقط ظرف مدت 34 دقیقه پس از تکثیر به دست آمد در حالی که تکثیر اسیدهای نوکلئیک با استفاده از پره‌میکس متداول پس از حدود 1 ساعت و 46 دقیقه کامل شد. تمامی محصولات با آنزیم محدودالاثر (Tsp509I TasI) مورد هضم قرار گرفت. پس از هضم در فاسیولا هپاتیکا دو باند 151 و 312 جفت باز و در فاسیولا ژیگانتیکا سه باند 93، 151 و 219 جفت باز تولید شد. استنتاج: واکنش Fast PCR با استفاده از پره میکس Sapphire Amp® در کم‌تر از 3/1 زمان استفاده از سایر پره میکس‌های رایج کامل می‌شود. روش جدید Fast PCR با استفاده از پره میکس. Sapphire Amp® Fast PCR یک متد آسان، سریع و در عین حال دقیق بوده که جهت تعیین و تشخیص افتراقی گونه‌های فاسیولادر مطالعات اپیدمیولوژیک در انسان و دام‌های اهلی در مناطق اندمیک فاسیولیازیس کاربرد دارد. Background and purpose: Fasciola hepatica and Fasciola gigantica are common liver flukes that are the etiological agents of fasciolosis, which affects both domestic livestock and humans worldwide. In the present study we established a rapid, easy and also accurate tool, for differentiation between F. hepatica and F. gigantica using Fast PCR. Material and methods: Thirty adults of Fasciola species were isolated from sheep and cattle liver form abattoirs in Mazandaran province. ITS1 rDNA region were amplified by Sapphire Amp® Fast PCR and compared with AccuPower® Taq PCR PreMix from Bioneer. In addition, PCR-RFLP assay using Tsp509I was performed for identification of F. hepatica and F. gigantica. Results: A fragment of approximately 463bp was amplified in all of the Fasciola samples using Sapphire Amp® Fast PCR premix in just 34 minutes, while nucleic acid amplification was completed in about 1 hour and 46 minutes by Bioneer PCR master mix. All PCR products were digested with restriction enzyme TasІ (Tsp509I). After digestion, F. hepatica revealed two fragments of 151 and 312 bp while F. gigantica produced three fragments of 93, 151, and 219 bp. Conclusion: Fast PCR reaction using Sapphire Amp® Fast PCR premix was completed three times faster than the time of conventional premix. The new Fast PCR assay using Sapphire Amp® Fast PCR premix provides a simple, rapid and accurate technique for identification and differentiation of Fasciola species in epidemiological researches on human and domestic animals in endemic regions of fasciolosis. فاسیولا هپاتیکا, فاسیولا ژیگانتیکا, Fast PCR Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, Fast PCR 72 80 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4883-60&slc_lang=fa&sid=1 Azadeh Mizani آزاده میزانی 100319475328460052280 100319475328460052280 No PhD Student in Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Pouria Gill پوریا گیل 100319475328460052281 100319475328460052281 No Assistant Professor, Department of Physiology and Pharmacology, Faculty of Medicine, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استادیار، گروه فیزیولوژی و فارماکولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Shahabedin Sarvi شهاب الدین سروی shahabesarvi@yahoo.com 100319475328460052282 100319475328460052282 Yes Assistant Professor, Department of Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Faculty of Medical Mycology and Parasitology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استادیار، گروه انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ahmad Daryani احمد دریانی 100319475328460052283 100319475328460052283 No Professor, Department of Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Faculty of Medical Mycology and Parasitology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، گروه انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mehdi Sharif مهدی شریف 100319475328460052284 100319475328460052284 No Professor, Department of Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Faculty of Medical Mycology and Parasitology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، گروه انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mohammad Taghi Rahimi محمد تقی رحیمی 100319475328460052285 100319475328460052285 No PhD Student in Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Azar Shokri آذر شکری 100319475328460052286 100319475328460052286 No PhD Student in Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ehsan Ahmadpour احسان احمدپور 100319475328460052287 100319475328460052287 No PhD Student in Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسوز، دانشکده انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران