Journal of Mazandaran University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران
J Mazandaran Univ Med Sci
Medical Sciences
http://jmums.mazums.ac.ir
1
admin
1735-9260
1735-9279
fa
jalali
1394
2
1
gregorian
2015
5
1
25
124
online
1
fulltext
fa
بررسی ایمنیزایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالدهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش
Immunogenicity Effect of Chitosan Nanoparticles Containing Botulinum Neurotoxin E binding Domain Recombinant Protein in Mice
ايمونولوژي
Immunology
پژوهشي-کامل
Research(Original)
چکیده
سابقه و هدف: نوروتوکسینهای باکتری کلستریدیوم بوتولینوم از قویترین سموم شناخته شده میباشند که سبب بروز سندروم خطرناک بوتولیسم در انسان و حیوان میشوند. تحقیقات نشان داده است که زیر واحد اتصالی این سم دارای خاصیت ایمنیزایی بوده و میتواند در تهیه واکسن نوترکیب مورد استفاده قرار گیرد. از آنجا که واکسنهای نوترکیب به تنهایی قادر به برانگیختن موثر پاسخهای ایمنی نیستند، استفاده از ادجوانتهای زیستسازگار و ایمن از اهمیت زیادی برخوردار است. در سالهای اخیر مطالعات زیادی جهت استفاده از نانوذرات به عنوان ادجوانت و نیز بستری جهت رسانش واکسن صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، بررسی اثر نانوذرات کیتوسان بر روی رسانش موثر یک کاندید واکسن نوترکیب علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E بود.
مواد و روشها: بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی BoNT/E در باکتری E. coli BL21 (DE3) صورت پذیرفت. نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین مذکور با روش ژلاسیون یونی ساخته شد و به صورت زیرجلدی به موش تزریق گردید. همزمان، آنتیژن مورد نظر همراه با ادجوانت فروند نیز به گروه موشی جداگانه، تزریق شد و در نهایت میزان تیتر آنتیبادی IgG با روش الایزای غیرمستقیم مورد بررسی قرار گرفت.
یافتهها: پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی BoNT/E، بیان و تخلیص شد و سپس به وسیله وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. میزان بارگذاری پروتئین در نانوذرات بیش از 90 درصد بود. نتایج الایزا نشان داد که میزان تولید آنتیبادی IgG پس از هربار تزریق افزایش یافته است.
استنتاج: نتایج این تحقیق نشان میدهد نانوذرات کیتوسان توانایی تحریک موثر سیستم ایمنی هومورال را دارد.
Abstract
Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate the immune responses, therefore, the use of biocompatible and safe adjuvants is inevitable. In recent years, there have been many studies on the adjuvanticity effect of nanoparticles and their role as delivery vehicles of recombinant vaccines. This study investigated the vaccine delivery effect of chitosan nanoparticles for administration of a recombinant candidate vaccine against Clostridium botulinum type E.
Materials and methods: The expression and purification of botulinum neurotoxin type E was done in E. coli BL21 (DE3). Chitosan nanoparticles were synthesized by ionic gelation method. The protein containing nanoparticles were administered to mice subcutaneously. At the same time, a control group received the candidate vaccine in combination with the Freund adjuvant. Finally, the IgG titers of immunized mice were assayed by ELISA.
Results: The recombinant protein was successfully expressed and purified and was subsequently confirmed by western blot analysis. The loading capacity of the recombinant antigen into nanocapsules was calculated as 90%. ELISA results showed an increase in the IgG titer after each administration.
Conclusion: The present study shows that the chitosan nanoparticles containing a recombinant vaccine could efficiently stimulate the humoral immune responses.
پروتئین نوترکیب BoNT/E, نانوذرات کیتوسان, ادجوانتها, سنجش آنتیبادی
BoNT/E recombinant protein, chitosan nanoparticles, adjuvants, antibody assay
37
47
http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5029-75&slc_lang=fa&sid=1
MohamadJavad
Bagheripour
محمدجواد
باقری پور
100319475328460050622
100319475328460050622
No
MSc in Medical Microbiology, Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran
کارشناس ارشد میکروبشناسی پزشکی، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران
Firouz
Ebrahimi
فیروز
ابراهیمی
febrhimi@ihu.ac.ir
100319475328460050623
100319475328460050623
Yes
Assistant Professor, Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran
استادیار، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران
Abbas
Hajizadeh
عباس
حاجی زاده
100319475328460050624
100319475328460050624
No
MSc in Cellular & Molecular Biology, Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran
کارشناس ارشد زیستشناسی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران
Shahram
Nazarian
شهرام
نظریان
100319475328460050625
100319475328460050625
No
Assistant Professor, Biological Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran
استادیار، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران