fa ارزیابی کمی و بهینه سازی تشخیص DNA آسپرژیلوس فومیگاتوس در نمونه خون با استفاده از تکنیک Real time PCR پژوهشي-کامل Research(Original) <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف: </span>آسپرژیلوزیس مهاجم عفونت فرصت طلب جدی ناشی از گونه های مختلف قارچ آسپرژیلوس است که اغلب در افراد دارای نقص سیستم ایمنی رخ می دهد. اساسا، تشخیص سریع و زودرس آن، از پیشرفت این عفونت قارچی جلوگیری بعمل می آورد. هدف از این مطالعه تعیین کمی و بهینه سازی DNA آسپرژیلوس فومیگاتوس در خون با استفاده از تکنیک Real time PCR بود.<br><span style="font-weight: bold">مواد و روش ها: </span>پنج میلی لیتر خون داوطلب سالم را با رقت های مختلفی از کونیدی های آسپرژیلوس فومیگاتوس (106 تا 101) آلوده شد. استخراج DNA از خون با استفاده از گلوله شیشه ای و کیت QIAmp DNA Blood Mini Kit انجام شد. پرایمر و پروب های هیبریدیزاسیون برای تکثیر سکانس های اختصاصی گونه متعلق به ژن18S rRNA آسپرژیلوس فومیگاتوس طراحی و با استفاده از روشReal time و تکنیک FRET مورد بررسی قرار گرفت.<br><span style="font-weight: bold">یافته ها:</span> تمامی واکنش های PCR با DNA دیگر گونه های قارچی منفی بودند که نشان دهنده اختصاصیت 100 درصد این روش بود. آنالیز دمای ذوب آسپرژیلوس فومیگاتوس تنها در یک نقطه حداکثر سیگنال دمایی را با پروب در دمای 69.16 C نشان دادکه به تشخیص آسپرژیلوس فومیگاتوس کمک می کند. حداقل مقدار DNA (100fg) CFU 110 معادل 10 کونیدی یا سلول در هر واکنش PCR مشخص گردید که نشان دهنده حساسیت بالای این روش می باشد.<br><span style="font-weight: bold">استنتاج:</span> روش Real time PCR با بکارگیری پروب های هیبریدیزاسیون دارای اختصاصیت و حساسیت بالا برای اندازه گیری بار قارچی جهت تشخیص زودرس و مانیتورینگ درمان می باشد. </div> <span style="font-weight: bold">Background and purpose:</span> Ïnvasive aspergillosis (ÏÂ) is a serious opportunistic infection caused by various species of Âspergillus in immnucompromissed individuals. Basically, rapid and early diagnosis prevents ÏÂ progression. The purpose of this study was to quantify and optimize detection of Âspergillus fumigatus DNÂ in blood samples using Real Time PÇR. <br><span style="font-weight: bold">Materials and methods:</span> Five milliliter blood samples of healthy volunteers were spiked with various dilutions of conidial suspension of Âspergillus fumigatus (106 to 101). DNÂ was extracted from blood using glass beads and QÏÂmp DNÂ Blood Mini Kit. The primers and hybridization probes were designed to amplify the 18S rRNÂ genes using the LightÇycler system and Fluorescence Resonance Ënergy Transfer. <br> <span style="font-weight: bold">Results:</span> Âll PÇR reactions were negative with other species of fungal DNÂ with 100% specificity. Melting curve analysis showed the species- specific melting temperature patterns on 69.14oÇ which help to differentiate Âspergillus fumigatus. The lower limit was determined 101 ÇFÜ (100 fg) or 10 conidia or cells per PÇR reaction which indicates a high sensitivity. <br><span style="font-weight: bold">Çonclusion:</span> Real-time PÇR method employing hybridization probes is a highly specific and sensitive approach to determine the fungal load for early diagnosis and monitoring treatment. آسپرژیلوزیس مهاجم، Quantitative PCR، تشخیص Ïnvasive aspergillosis, quantitative PÇR, diagnosis 34 43 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-645&slc_lang=fa&sid=1 M Nabili مجتبی نبیلی 10031947532846004674 10031947532846004674 No T Shokohi طاهره شکوهی shokohi.tahereh@gmail.com 10031947532846004675 10031947532846004675 Yes M.B Hashemi Soteh سیدمحمدباقر هاشمی سوته 10031947532846004676 10031947532846004676 No GH Jan Babaie قاسم جانبابایی 10031947532846004677 10031947532846004677 No S.R Âghili سیدرضا عقیلی 10031947532846004678 10031947532846004678 No Z Hoseinikhah زهرا حسینی خواه 10031947532846004679 10031947532846004679 No