fa جدا نمودن ژن تنظیمی استرپتومایسین فاقد پروموتر [StrR2] از استرپتومایسز گریزئوس پژوهشي-کامل Research(Original) <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف: </span>استفاده از PCR برای شناسایی و جدا نمودن ژن ‌ها یک روش نسبتا سریع و دقیق می باشد. نکته قابل تامل در این تکنیک هدفمند طراحی نمودن پرایمرهای مورد استفاده می‌ باشد. پرایمرها طوری طراحی می ‌شوند که نه تنها ویژگی‌ های ژنوم در نظر گرفته شود، بلکه کلونینگ ژن نیز منظور و یا به عبارت دیگر تسهیل گردد. آنتی بیوتیک استرپتومایسین توسط استرپتومایسز گریزئوس با به کار بردن دسته ژنی Str با بیش از 25 ژن تولید می ‌شود. این دسته ژنی دارای ژن StrR است که پروتئین تنظیم کننده اختصاصی این دسته ژنی را کد می ‌نماید. هدف از این تحقیق جدا نمودن ژن StrR2 بدون پروموتر آن و سپس کلونینگ آن بود.<br><span style="font-weight: bold">مواد و روش ها:</span> جهت جدا نمودن ژن StrR بدون پروموتر ذاتی خود، StrR2 فاقد پروموتر آغازگرهای مختلفی طراحی گردید. یک جفت از این آغازگرها (St Nes)، ژن StrR را در ژنوم شناسایی کرد و همچنین Nested-PCR برای شناسایی ژن StrR2 تکثیر شده نیز به کار رفت. در سایر آغازگرها (Str nP2 و Str nP1) جایگاه ‌های BamHI و XbaI طراحی شد، این آغازگرها نه تنها ژن StrR2 را تکثیر کردند، بلکه جایگاه ‌های برش آنزیمی در قطعات تکثیر شده را نیز ایجاد کردند.<br><span style="font-weight: bold">یافته ها: </span>ژن StrR2 فاقد پروموتر با استفاده از PCR تکثیر گردید و ساختار آن مورد تایید قرار گرفت. کلونینگ این ژن به‌ طور موفقیت آمیز صورت گرفت. سپس ساختار پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از روش ‌های مختلف چون الکتروفورز،PCR وهضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت.<br><span style="font-weight: bold">استنتاج: </span>با استفاده از این وکتور می ‌توان ژن StrR2 فاقد پروموتر را در وکتورهای ویژه استرپتومایسز که واجد پروموترهای القایی هستند ساب کلون نمود. </div> <span style="font-weight: bold">Background and purpose:</span> Polymerase chain reaction (PÇR) is a rather quick and accurate method employed for gene detection and isolation. Primer designing is an important issue in this technique and plays a critical role in considering both the genome properties and cloning of the isolated genes. Streptomycin antibiotic is produced by Streptomyces griseus using str gene cluster with more than 25 genes. This gene cluster contains StrR gene encoding a specific protein regulator of this cluster. The pathway specific transcriptional activator then induces transcription of other genes in the str gene cluster. Ïn this study, the researchers aimed at isolating promoterless StrR2 gene and then cloning it. <br> <span style="font-weight: bold">Materials and methods:</span> To isolate promoterless StrR gene, a set of primers (StrR2) was designed. Ône pair of these primers (St Nes) detected the StrR from the genome. Moreover, Nested-PÇR was then used to detect amplified StrR2 gene. Sites for BamHÏ and XbaÏ were designed in other primers (Str nP1and Str nP2). These primers not only amplified the StrR2 gene but also created restriction enzyme sites in the amplified fragments. <br> <span style="font-weight: bold">Results:</span> Üsing PÇR, the promoterless StrR2 gene was amplified and its structure was confirmed. This gene was successfully cloned, too. The correct structure of the recombinant plasmids was confirmed using different techniques such as gel electrophoresis, PÇR and restriction digestion analysis. <br><span style="font-weight: bold">Çonclusion: </span>Üsing this vector, one can subclone the promoterless StrR2 gene in the Streptomyces expression vectors containing inducible promoters. استرپتومایسین، ژن StrR2 فاقد پروموتر، استرپتومایسز گریزئوس Streptomycin, promoterless StrR2 gene, Streptomyces griseus 23 31 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-666&slc_lang=fa&sid=1 Z Hojati زهره حجتی نجف آبادی z.hojati@sci.ui.ac.ir 10031947532846004477 10031947532846004477 Yes M Motovali-bashi مجید متولی باشی 10031947532846004478 10031947532846004478 No GH.R Bidkhori غلامرضا بیدخوری 10031947532846004479 10031947532846004479 No