fa بهینه‌سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین C) در باکتری E.coli سویه BL21 بیوشیمی Sports biomechanics پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL">سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره‌ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه‌های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین <span dir="LTR">C</span> را جهت دفاع و شکار ترشح می‌کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین <span dir="LTR">C</span> به اشیرشیاکلی سویه <span dir="LTR">BL21</span>، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان می‌باشد.</p> <p dir="RTL">مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتری‌ها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن <span dir="LTR">FraC</span> به‌وسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری‌ها روی محیط حاوی آنتی‌بیوتیک مناسب (آمپی‌سیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش‌تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید <span dir="LTR">GF-1</span> صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیم‌های <span dir="LTR">NcoI</span> و<span dir="LTR">Hind</span> <span dir="LTR">ІІІ </span>&nbsp;و هم‌چنین کنترل <span dir="LTR">PCR</span> قرار گرفتند. بعد از تأیید حضور پلاسمید حاوی ژن <span dir="LTR">FraC</span> در باکتری میزبان، باکتری‌ها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین <span dir="LTR">FraC</span> توسط <span dir="LTR">IPTG 1mM</span> در زمان‌های مختلف و دمای <span dir="LTR">c</span>&ordm;20 القا شدند. پس از جمع‌آوری باکتری‌های بیان‌کننده <span dir="LTR">FraC</span> در زمان‌های مختلف، بیان آن‌ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلی‌آکریل آمید<span dir="LTR">(SDS-PAGE) </span>&nbsp;مشهود بود.</p> <p dir="RTL">یافته‌ها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن <span dir="LTR">FraC</span> با موفقیت انتقال یافت. هم‌چنین نتایج <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> نشان داد که <span dir="LTR">FraC</span> در زمان‌های 6 و 8 ساعت با استفاده از <span dir="LTR">IPTG 1mM</span> در دمای <span dir="LTR">c</span>&ordm;20 بیش‌ترین بیان را دارند.</p> <p><span dir="RTL">استنتاج:</span> <span dir="RTL">با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تأثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب می</span><span dir="RTL">‌</span><span dir="RTL">تواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتری</span><span dir="RTL">‌</span><span dir="RTL">ها یاری کند.</span></p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Sea anemones of the genus Actinia are commonly found in the intertidal zone of the northern rocky coast of Spain. <em>Actinia fragacea </em>is one of the most important species that secretes a toxic protein, <a name="OLE_LINK12"></a><a name="OLE_LINK11">fragaceatoxin C (FraC), </a>for defense and hunting purposes. The aim of this study was transformation of plasmid containing the gene encoding the FraC to <em>Escherichia coli</em> bacterial strain BL21, and identifying optimum expression condition.</p> <p><strong>Materials and methods:</strong> In this experimental study, chemical transformation was conducted by washing the bacteria with cold calcium chloride to take up the plasmid containing the FraC gene. To ensure the transformation of plasmids, bacteria were grown on a medium containing an appropriate antibiotic (ampicilin). For greater certainty, the minipreparation of transformed plasmids was done using GF-1 plasmid extraction Kit. The plasmids were then went under digestion check using NcoІ and Hind ІІІ enzymes and PCR check. After confirming the presence of a plasmid containing FraC in the host bacteria, the bacteria were induced by 1mM IPTG in different times at 20 &ordm;C to find the optimum expression conditions<a name="OLE_LINK5">. After collecting bacteria expressing FraC </a>at different times, its expression was visualized on Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE).</p> <p><strong>Results:</strong> Our results showed that the plasmid containing the FraC was successfully transformed. Also SDS-PAGE results indicated that the FraC was successfully expressed at times of 6 and 8 h using 1mM IPTG at 20 &ordm;C.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> According to the results, both steps of chemical transformation had significantly influenced the transformation efficiency. Following the principles and selecting optimum temperature could help us in finding the optimum conditions for expression of each specific protein in bacteria. &nbsp;</p> <p></p> شقایق دریایی, فراگاسیا توکسین C, انتقال, بیان, اشیرشیاکلی Sea Anemones, Fragaceatoxin C, transformation, expression, E.coli 62 73 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5029-156&slc_lang=fa&sid=1 Babak Abdi بابک عبدی 100319475328460086088 100319475328460086088 No MSc Student in Biochemistry, Department of Biology, Faculty of Science, Urmia University, Urmia, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Rashid Jamei رشید جامعی 100319475328460086089 100319475328460086089 No Associate Professor, Department of Biology, Faculty of Science, Urmia University, Urmia, Iran دانشیار بیوشیمی، گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Mehdi Imani مهدی ایمانی :m.imani@urmia.ac.ir 100319475328460086090 100319475328460086090 Yes Assistant Professor, Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran استادیار بیوشیمی، گروه علوم پایه، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران