fa بیان و خالص سازی پروتئین کایمر نوترکیب (3M2e-HA2) واجد نواحی حفاظت شده هماگلوتینین و پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا در راستای تولید واکسن زیرواحدی جهانی پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL">سابقه و هدف: ویروس آنفلوانزا یکی از مهم&rlm;ترین عوامل عفونی در سراسر جهان است که تغییرات آنتی&rlm;ژنیک آن چالش بزرگی در مسیر تولید واکسن می&rlm;باشد. در حال حاضر اکثر پژوهش&rlm;ها بر روی توسعه واکسن&rlm;های زیرواحدی حاصل از پپتیدهای آنتی&rlm;ژنیک حفاظت شده ویروس متمرکز شده است. زیر واحد کوچک مولکول هماگلوتینین <span dir="LTR">(HA2)</span> و بخش آمینی خارج سلولی پروتئین کانال یونی <span dir="LTR">(M2e)</span> با 23 اسید آمینه، در همه ویروس&rlm;های آنفلوانزای <span dir="LTR">A</span> انسانی بسیار حفاظت شده هستند و هدف مناسبی برای تولید واکسن آنفلوانزای وسیع الطیف می&rlm;باشند.</p> <p dir="RTL">مواد و روش‌ها: در این پژوهش، قطعه ژنی <span dir="LTR">3M2e</span> سنتتیک، بالا دست ژن <span dir="LTR">HA2</span> در سازه <span dir="LTR">pET28a-HA2</span> پس از هضم آنزیمی با آنزیم <span dir="LTR">BamH1</span>، کلون شد. سازه واجد کایمر <span dir="LTR">3M2e-HA2</span> به باکتری <em><span dir="LTR">E.coli</span></em> سویه <span dir="LTR">BL21</span> منتقل شد و سلول&rlm;ها در محیط مایع <span dir="LTR">LB</span> حاوی کانامایسین (<span dir="LTR">50</span><span dir="LTR">mg/ml</span>) بعد از القا با ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوزید <span dir="LTR">(IPTG)</span> به صورت کشت شبانه رشد داده شد. بررسی و تایید بیان سازه <span dir="LTR">3M2e-HA2</span> به وسیله الکتروفورز روی ژل پلی&rlm;آکریل&rlm;آمید <span dir="LTR">PAGE</span> <span dir="LTR">SDS-</span> و وسترن بلات با استفاده از آنتی&rlm;بادی&rlm;های مونوکلونال اختصاصی انجام شد و سپس پروتئین نوترکیب توسط ستون <span dir="LTR">Ni-TED</span> تخلیص گردید.</p> <p dir="RTL">یافته‌ها: نتایج کلونی <span dir="LTR">PCR</span> و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن <span dir="LTR">3M2e</span> در وکتور <span dir="LTR">pET28a-HA2</span> به طور صحیح و در قاب خواندنی دنبال هیستیدینی کلون شده است.</p> <p dir="RTL">استنتاج: شناسایی آنتی&rlm;بادی علیه اپی توپ&rlm;های حفاظت شده <span dir="LTR">HA2</span> و <span dir="LTR">M2e</span>، گامی مهم به سوی ساخت واکسن جهانی ویروس آنفلوانزا است، بنابراین سازه <span dir="LTR">&nbsp;(3M2e-HA2)</span>تهیه شده در این مطالعه می&rlm;تواند کاندید واکسن زیر واحدی مناسبی برای پیشگیری از این عفونت باشد.</p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Influenza virus is one of the most important respiratory infectious agents. Viral antigenic variations are major problems for vaccine production process. At present, many researches have focused on conserved domains of influenza virus antigenic peptides for subunit vaccine development. Hemagglutinin small subunit (HA2) and the 23 amino acid extracellular N-terminal domain of proton selective ion channel (M2e) are highly conserved in all human influenza A strains and very attractive for broad-spectrum universal influenza vaccine production.</p> <p><strong>Materials and methods:</strong> In this study, the synthetic 3M2e gene was cloned upstream of HA2 gene following digestion by BamH1. Chimeric construct pET28a-3M2e-HA2 was transformed into <em>E.coli </em>(BL21) and the cells were grown overnight in LB broth media containing 50 mg/ml kanamycin after induction of isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Expression of chimer protein 3M2e-HA2 was approved by sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and western blot analysis using monoclonal specific antibody. Then, the recombinant protein was purified using Ni-TED columns.</p> <p><strong>Results:</strong> The result of colony PCR, restriction enzyme digestion and sequencing revealed that the 3M2e gene was properly cloned into pET28a- HA2 and was in frame to histidin tag.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> Identification of antibodies against conserved epitopes of (HA2) and (M2e) is an important step toward development of influenza vaccine, hence, chimer protein (3M2e-HA2) prepared in this study could be an appropriate subunit vaccine candidate for preventing influenza virus infection.</p> ویروس آنفلوانزا, کایمر 3M2e-HA2, واکسن زیر واحدی Influenza, M2e, Hemagglutinin, chimer, subunit vaccine 12 22 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5029-267&slc_lang=fa&sid=1 Neda Jalili ندا جلیلی 100319475328460084729 100319475328460084729 No MSc in Genetic, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Najmeh Taheri نجمه طاهری 100319475328460084730 100319475328460084730 No MSc in Molecular Cell Biology, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد سلولی مولکولی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Rezvan Tavakoli رضوان توکلی 100319475328460084731 100319475328460084731 No MSc in Microbiology, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد میکروب شناسی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Fatemeh Fotoohi فاطمه فتوحی 100319475328460084732 100319475328460084732 No Associate Professor, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran استاد، گروه آنفلوانزا و سایر ویروسهای تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Atieh Akbari عطیه اکبری 100319475328460084733 100319475328460084733 No MSc in Genetic, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran کارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Behrokh Farahmand بهرخ فرهمند b_farahmand@pasteur.ac.ir 100319475328460084734 100319475328460084734 Yes Assistant Professor, Department of Influenza and other respiratory virus, Institute Pasteur of Iran, Tehran, Iran استادیار، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران