fa طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1 بيولوژي Biology پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL">سابقه و هدف: در این پروژه، هدف کلی تحقیق طراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول <span dir="LTR">Vpr</span> ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی <span dir="LTR">(HIV-1)</span> با استفاده از وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> بود. کلونینگ ژن <span dir="LTR">Vpr</span> قبلاً درون وکتور <span dir="LTR">pEGFP_N1</span> صورت نگرفته بود.</p> <p dir="RTL">مواد و روش‌ها: وکتور <span dir="LTR">pUC19</span> دارای ژن تمام طول <span dir="LTR">Vpr</span> جهت تایید با استفاده از آنزیم‌های محدود کننده برش داده شد. سپس جهت اضافه کردن سایت‌های برش آنزیمی <span dir="LTR">(XhoI, KpnI)</span> در ژن مورد نظر مطابق با سایت های موجود در وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> با طراحی پرایمر واکنش <span dir="LTR">PCR</span> بر روی ژن <span dir="LTR">Vpr</span> با استفاده از پلاسمید نوترکیب <span dir="LTR">pUC19-Vpr</span> به عنوان الگو انجام گرفت. محصول پس از الکتروفورز، مورد استخراج از ژل قرار گرفته و تخلیص گردید. سپس هر دو محصول <span dir="LTR">PCR</span> و وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> تحت واکنش هضم آنزیمی قرار گرفتند. در مرحله بعد، واکنش الحاق توسط آنزیم <span dir="LTR">T4</span> انجام گرفت و این ژن به درون وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> کلون شده و به درون باکتری <span dir="LTR">DH5a</span> ترنسفورم گردید. در نهایت سازه استخراج شده و با هضم آنزیمی و <span dir="LTR">PCR</span> مورد تایید قرار گرفت.</p> <p dir="RTL">یافته‌ها: در این پروژه ابتدا ژن<span dir="LTR">Vpr </span>&nbsp;درون وکتور <span dir="LTR">pUC19</span> پس از برش آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. سپس این ژن به طور تمام طول و با قرار دادن توالی‌های برش از 2 آنزیم محدودالاثر در طراحی پرایمرهای اختصاصی در واکنش <span dir="LTR">PCR</span> تکثیر داده شد و اندازه محصول در الکتروفورز مورد تایید قرار گرفت. محصول واکنش الحاق ژن <span dir="LTR">Vpr</span> به طور تمام طول در وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> نیز هم در هضم آنزیمی و هم در <span dir="LTR">PCR</span> مورد تایید قرار گرفت.</p> <p dir="RTL">استنتاج: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول <span dir="LTR">Vpr</span> ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی با استفاده از وکتور <span dir="LTR">pEGFP-N1</span> با موفقیت انجام گرفت.</p> <p><strong>Background and purpose:</strong> The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done.</p> <p><strong>Materials and methods:</strong> As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separate the Vpr gene. The specific primers for Vpr gene including the restriction sites of XhoI and KpnI were designed according to the multiple cloning site of pEGFP-N1 and PCR reaction was performed using the pUC 19-Vpr vector as a template. The PCR product was undergone electrophoresis and gel extraction. Digestion reaction was done on both the extracted PCR product and the pEGFP-N1vector. The recombinant pEGFP-N1-Vpr vector was achieved by the ligation reaction using the T4 DNA ligase and it was transformed into the<br> E-coli (DH5&alpha;) and propagated. Finally, confirmation was done through the restriction enzyme digestion and PCR amplification.</p> <p><strong>Results:</strong> The recombinant vector pUC19-Vpr was confirmed using the restriction enzymes digestion, and then Vpr gene was successfully amplified using its specific primers including restriction sites for XhoI and KpnI. The PCR product was confirmed by electrophoresis. Finally, a recombinant vector pEGFP-N1 containing the full length of human immunodeficiency virus-1 Vpr gene (pEGFP-N1-Vpr) was successfully constructed.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> HIV-1 Vpr gene in its full length size could be ligated into the pEGFP-N1.</p> ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی, ژن Vpr, وکتور pEGFP-N1 Human Immunodeficiency Virus-1, Vpr gene, pEGFP-N1 23 31 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3397-65&slc_lang=fa&sid=1 Maedeh Ramezanpour مائده رمضان پور 100319475328460084737 100319475328460084737 No MSc Student in Genetic, Faculty of Biology, Islamic Azad University, Tehran Medical branch, Tehran, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، تهران، ایران Pooneh Rahimi پونه رحیمی E-mail: prahimi@pasteur.ac.ir 100319475328460084738 100319475328460084738 Yes Associate Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran دانشیار، بخش هپاتیت وایدز، انیستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Mehrdad Hashemi مهرداد هاشمی 100319475328460084739 100319475328460084739 No Associate Professor, Department of Biology, Faculty of Biology, Islamic Azad University, Tehran Medical branch, Tehran, Iran دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران، تهران، ایران Seyed Mehdi Sadat سیدمهدی سادات 100319475328460084740 100319475328460084740 No Assistant Professor, Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran استادیار، بخش هپاتیت وایدز، انیستیتو پاستور ایران، تهران، ایران