fa مهار ژن هومانین جهت بررسی اثرات آن در اثر بخشی داروی Etoposide در رده سلولی سرطان معده ژنتیک genetic پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL"><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">هومانین یک پپتید 24 آمینواسیدی می‌باشد که به عنوان فاکتور ایفاکننده‌ی نقش اتوفاژی در نظر گرفته می‌شود. نقش بدیهی آن در مهار آپوپتوز در سلول‌ها مشخص شده است، اما اهمیت آن در اتوفاژی در حال بررسی است. در این مطالعه به بررسی نقش پروتئین هومانین در القاء اتوفاژی و اثر دهی داروی شیمی درمانی اتوپوزاید پرداخته شد.</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"></span></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">در این مطالعه تجربی، جهت سنتز و کلون کردن این ژن از وکتور </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">pcDNA3.1</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> استفاده گردید. با روش الکتروپوریشن وارد رده سلولی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> شد. میزان بیان به وسیله‌ی روش‌های </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">و</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Real-time PCR</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در رده‌ی سلولی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> ارزیابی شد. جهت مهار این ژن از مولکول‌های </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">siRNA</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> اختصاصی استفاده گردید. جهت وارد کردن </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">siRNA</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> به رده سلولی </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">AGS</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> نو ترکیب از لیپوفکتامین استفاده شد و اثرات مهار هومانین بر کارآیی عوامل شیمی درمانی با استفاده از آزمون‌های </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Real-time PCR</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> و</span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">Assay MTT</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> مورد بررسی قرار گرفت.</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> با توجه به نتایج داده<span style="letter-spacing:-.1pt;">‌</span>های این مطالعه، دوز 100 نانو مول از </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">siRNA</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> حدود 40 درصد، باعث افزایش مرگ و میر سلول<span style="letter-spacing:-.1pt;">‌</span>های سرطانی </span></span><span style="font-family:b zar;">شد (</span><span style="font-family:b zar;">05/0</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">p<</span></span><span style="font-family:b zar;">).<span style="color:black;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span></span> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">این مطالعه، مطالعه ای اولیه در مورد نقش ژن هومانین در القای </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">autophagy</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> در سلول</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">های سرطانی بوده است و به طور دقیق مکانیسم آن در القاء </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">autophagy</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> مورد بررسی قرار گرفت. در این مطالعه مشاهده شد، مهار </span></span></span><span dir="LTR" style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">HN3</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> می</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">تواند اثر عوامل شیمی درمانی در سلول</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">های سرطانی را افزایش دهد.</span></span></span></p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Humanin is a 24-aa peptide that is considered as one of the probable players of autophagy. Its inevitable role in the inhibition of apoptosis in cells is revealed, but its probable importance in autophagy is under evaluation. This study evaluated the role of humanin protein in induction of autophagy and efficacy of chemotherapy drug etoposide<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Materials and methods:</strong> HN3 gene was synthesized and cloned in pcDNA3.1 vector and electroporated in AGS cell line. Expression analysis in AGS cell line was done by SDS-PAGE and Real-time PCR using specific primers. HN3 gene inhibition was done using specific siRNA molecules. siRNAs transfection to the recombinant AGS cell line was done using Lipofectamine. The effects of the humanin inhibition on efficacy of chemotherapy agents was studied using Real-time PCR and MTT assay<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Results:</strong> Our data showed that dose of 100 nm of siRNA caused about 40% increase in the mortality of cancer cells.<span dir="RTL"></span><br> <strong>Conclusion:</strong> To the best of our knowledge the current research was the first on the role of humanin gene in induction of autophagy in stressful cancer cells that evaluated its exact mechanism in autophagy induction. In addition, HN3 inhibition could increase the efficacy of chemotherapy agents in cancer cells<span dir="RTL">.</span><br> &nbsp;</p> سرطان معده, اتوفاژی, ژن هومانین, اتوپوزاید, siRNA stomach cancer, autophagy, humanin, etoposide, SiRNA 1 19 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-7347-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Shokrzadeh محمد شکرزاده mslamuk@yahoo.com 100319475328460087112 100319475328460087112 No دانشیار، ﮔﺮوه ﺳﻢ ﺷﻨﺎﺳﻲ ﻓﺎرﻣﺎﻛﻮﻟﻮژی، ﻣﺮﻛﺰ ﺗﺤﻘﻴﻘﺎت ﻋﻠﻮم داروﻳﻲ، داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﻜﻲ ﻣﺎزﻧﺪران، ﺳﺎری، اﻳﺮان Javaneh Charkhtab Moghaddam جوانه چرختاب مقدم javaneh_ch@yahoo.com 100319475328460087113 100319475328460087113 No دکتری داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، واحد بین الملل رامسر، رامسر، ایران Nafiseh Nasri Nasrabadi نفیسه نصری نصرآبادی n_nasri2000@yahoo.com 100319475328460087114 100319475328460087114 Yes دانشجوی دکتری تخصصی پژوهشی، مرکز تحقیقات علوم دارویی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران Mojtaba Najafi مجتبی نجفی telia412@yahoo.com 100319475328460087115 100319475328460087115 No دکتری ژنتیک و اصلاح دام، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری، ساری، ایران