fa بررسی ایمنی زائی نانوژل کایتوسان واجد پروتئین نوترکیب IpaC از شیگلا در خوکچه هندی بيولوژي Biology پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:kashida;text-kashida:0%;text-indent:17.0pt;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> گونه‌های شیگلا عامل بیماری شیگلوز در انسان می‌باشد. با توجه به فراوانی بیماری و شیوع مقاومت آنتی بیوتیکی، ساخت ایمونوژن موثر علیه باکتری هدف مهمی است. آنتی</span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">ژن</span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">های تهاجمی پلاسمید از جمله </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IpaC</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IpaD</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> از مهم‌ترین عوامل بیماری زای شیگلا هستند. بارگذاری آنتی‌ژن‌ها در حامل‌های ویژه از قبیل نانوژل‌های کیتوسانی، نه تنها آن ها را در برابر عوامل محیطی محفاظت کرده بلکه غلظت‌های مناسب از آنتی‌ژن را در محیط فراهم کرده و فعالیت زیستی را افزایش می دهد. هدف از این تحقیق، بررسی ایمنی زائی پروتئین </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IpaC</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> بارگذاری شده نانوژل های کیتوسان بود.</span></span></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:kashida;text-kashida:0%;text-indent:17.0pt;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> پروتئین نوترکیب در </span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> بیان و با گرموتوگرافی میل ترکیب تخلیص شد. نانوژل های کیتوسانی به روش ژلاسیون یونی و از طریق میانکنش کیتوسان با اتصال دهنده تری پلی فسفات (</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">TPP</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">) تهیه شدند. نانوژل ها با</span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;"> IpaC </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">بارگذاری و خصوصیات ساختاری آن ها با </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">SEM</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">DLS</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> بررسی گردید. پروتئین بارگذاری شده از مسیر خوراکی و تزریقی به خوکچه هندی انتقال یافتند. تیتر آنتی‌بادی‌ها با روش الایزا تعیین شد. حیوان ها از طریق روش سرنی و با استفاده از باکتری شیگلا فلکسنری چالش شدند.</span></span></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:kashida;text-kashida:0%;text-indent:17.0pt;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> بیان پروتئین نوترکیب </span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">E.coli</span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> منجر به تولید </span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-size:10.0pt;">IpaC</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> با وزن 60 کیلودالتون شد. ظرفیت بارگذاری نانوژل ها پس از 48 ساعت انکوباسیون، 98 درصد بود. متوسط اندازه نانوذرات 418 نانومتر بود. ایمن سازی موش‌ها پاسخ آنتی‌بادی سرمی را القا کرد.</span></span></p> <p dir="RTL" style="text-align:justify;text-justify:kashida;text-kashida:0%;text-indent:17.0pt;direction:rtl;unicode-bidi:embed;"><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"> حفاظت بخشی پروتئین بارگذاری شده از مسیر خوراکی بهتر از مسیر تزریقی بود.</span></span></p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Shigella species cause shigellosis in humans. Considering the high frequency of illness and antibiotic resistance, development of an effective immunogen against bacteria is a major goal. Invasion Plasmid Antigen such as IpaD and IpaC are the major bacterial virulence agents of Shigella. Encapsulation of antigens in particular carriers such as chitosanic&nbsp; nanogels, not only protects them from degradation in environmental elements but also provides the effective concentrations of antigens in targets, hence increasing bioactivity. The aim of this study was to investigate the immunogenic properties of IpaC protein encapsulated in chitosanic nanogels.</p> <p><strong>Materials and methods:</strong> The protein was expressed in <em>E.coli</em> and purified by affinity chromatography. Chitosan nanogels were prepared by ionic gelation method using tripolyphosphate (TPP) as a crosslinking agent. The nanogels were loaded with IpaC and their structures were characterized by SEM and DLS. Encapsulated protein was introduced in guinea pigs by oral and parenteral routes. Antibody titers were determined by ELISA. Animals were challenged By Sereny test with wild-type <em>S. flexneri</em>.</p> <p><strong>Results:</strong> Expression of recombinant protein in <em>E.coli</em> led to the production of IpaC with 60 kDa molecular weight. Loading efficiency of nanogel was 98<span dir="RTL">%</span> after 48h of incubation. The average particle size was 418 nm. Immunization of mice induced serum antibody response.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> The productivity of encapsulated protein via oral route was better than parenteral route.</p> <p></p> شیگلا, ایمونوژن, IpaC, کیتوسان, نانوژل nanogel, chitosan, Shigella, IpaC, immunogen 14 27 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3273-3&slc_lang=fa&sid=1 Shahram Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 100319475328460083618 100319475328460083618 No استادیار، مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Seyed Latif Mousavi Gargari لطیف موسوی گرگری :slmousavi@shahed.ac.ir 100319475328460083619 100319475328460083619 Yes استاد، گروه زیست شناسی،دانشکده علوم پایه،دانشگاه شاهد Mehdi Azimbeyk مهدی عظیم بیک mazimbeyk@ymail.com 100319475328460083620 100319475328460083620 No کارشناسی ارشد، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شاهد