fa تشخیص و افتراق سریع فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از روش loop-mediated Isothermal Amplification انگل شناسي parasitology پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL">سابقه و هدف: فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا فلوک‌های کبدی شایعی بوده که روی انسان‌ها و دام‌ها در تمام نقاط جهان اثرگذار هستند. در مطالعه حاضر ما تکنیک سریع <span dir="LTR">loop-mediated isothermal amplification (LAMP)</span> را در تشخیص و افتراق گونه‌های فاسیولا ارزیابی نمودیم.</p> <p dir="RTL">مواد و روش‌ها: تعداد 50 کرم فاسیولا از کبد گاو و گوسفند کشتارگاه‌های استان مازندران جداسازی شدند. تعداد 8 پرایمر جهت تکثیر ناحیه ژنی <span dir="LTR">28S ribosomal RNA</span> برای واکنش <span dir="LTR">LAMP</span> برای گونه‌های فاسیولا طراحی گردید. واکنش <span dir="LTR">LAMP</span> در حجم <span dir="LTR">&micro;I</span> 20 تحت شرایط تک دمایی در^{<span dir="LTR">0C</span>} 60 به مدت 90 دقیقه انجام گرفت. نتایج تکثیر با دیدن رسوب با استفاده از چشم غیر مسلح، استفاده از رنگ فلوئورسانس و ژل الکتروفورز بررسی شد. اختصاصیت روش <span dir="LTR">LAMP</span> برای فاسیولا با استفاده از <span dir="LTR">DNA</span> انگل‌های دیکروسلیوم دندریتیکم، تریکواسترونژیلوس کالابریفورمیس و اکینوکوکوس گرانولوزوس مورد سنجش قرار گرفت. جهت ارزیابی محدودیت تشخیص روش <span dir="LTR">LAMP</span> برای تعیین جنس فاسیولا رقت سریالی از <span dir="LTR">DNA</span> استخراج شده مورد استفاده قرار گرفت.</p> <p dir="RTL">یافته‌ها: واکنش مثبت <span dir="LTR">LAMP</span> با استفاده از پرایمرهای اختصاصی دو گونه تعداد زیادی باند در سایزهای متفاوت در دمای ^{<span dir="LTR">0C</span>}60 طی مدت 90 دقیقه تولید نمود. شرایط مطلوبی بدون هیچ واکنشی با سایر <span dir="LTR">DNA</span> انگل‌ها ایجاد گردید. محدودیت تشخیص روش <span dir="LTR">LAMP</span> تا <span dir="LTR">pg</span> 1 تعیین گردید. نتایج تشخیص رسوب و رنگ فلوئورسانس با الکتروفورز با ژل آگارز همخوانی داشتند.</p> <p dir="RTL">استنتاج: نتایج ما نشان دادند که روش <span dir="LTR">LAMP</span> یک روش سریع، آسان، کم هزینه با اختصاصیت بالا و معتبر جهت افتراق گونه‌های فاسیولا در مطالعات اپیدمیولوژیکی و بالینی فاسیولوزیس انسانی و دامی در مناطق اندمیک می‌باشد.</p> <p><strong>Background and purpose:</strong> <em>Fasciola hepatica</em> and <em>Fasciola gigantica</em> are common liver flukes which affect both human and livestock worldwide. In this study we evaluated the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for detection and discrimination of <em>Fasciola</em> species.</p> <p><strong>Materials and methods:</strong> Fifty adults of <em>Fasciola</em> worms were isolated from sheep and cattle liver form abattoirs in Mazandaran province. A total of 8 primer sets for LAMP was designed to amplify the 28S ribosomal RNA gene of <em>Fasciola</em> sp. Conventional LAMP was carried out in a 20&micro;I reaction mixture under isothermal condition at 60&deg;C for 90 minutes. Amplification result was observed by monitoring the turbidity by naked-eye, using fluorescent dye and gel electrophoresis. The specificity of LAMP method for detecting<em> Fasciola</em> sp. was tested by amplification of <em>Dicrocoelium dendriticum</em>, <em>Trichostrongylus colubriformis</em>, and <em>Echinococcus granulosus</em> DNA templates. To evaluate the detection limit of LAMP assay in detecting Fasciola genus, serial dilution of the extracted DNA was used.</p> <p><strong>Results:</strong> A positive LAMP reaction by the specific primers of two species produced many bands of different sizes in 60^0C after 90 min. The optimal assay conditions were established with no reaction with other parasites&rsquo; DNA. The detection limit of this LAMP assay was 1 pg DNA/tube. The result of turbidity and fluorescent dye detection were consistent with agarose gel electrophoresis.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> Our results demonstrated that LAMP is a rapid, cost-effective, highly specific, easy, and reliable method for differentiation of <em>Fasciola</em> sp. in epidemiological and clinical researches on human and domestic animals in endemic regions of fasciolosis.</p> فاسیولا هپاتیکا, فاسیولا ژیگانتیکا, loop-mediated isothermal amplification (LAMP) Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, loop-mediated isothermal amplification (LAMP) 45 53 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-29-464&slc_lang=fa&sid=1 Azadeh Mizani آزاده میزانی 100319475328460085515 100319475328460085515 No 1 PhD Student in Medical Parasitology, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran 2 PhD Student in Medical Parasitology, Student Research Committee, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی پزشکی، مرکز تحقیقات توکسوپلاسموز، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران 2. دانشجوی دکتری انگل شناسی پزشکی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Pooria Gill پوریا گیل 100319475328460085516 100319475328460085516 No Associate Professor, Department of Physiology, Pharmacology and Nanotechnology, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشیار، گروه فیزیولوژی، فارماکولوژی و نانوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Shahabeddin Sarvi شهاب الدین سروی shahabesarvi@yahoo.com 100319475328460085517 100319475328460085517 Yes Associate Professor, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشیار، مرکز تحقیقات توکسوپلاسموز، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Ahmad Daryani احمد دریانی 100319475328460085518 100319475328460085518 No Professor, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، مرکز تحقیقات توکسوپلاسموز، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Mehdi Sharif مهدی شریف 100319475328460085519 100319475328460085519 No Professor, Toxoplasmosis Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran استاد، مرکز تحقیقات توکسوپلاسموز، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران Afsaneh Amouei افسانه عمویی 100319475328460085520 100319475328460085520 No PhD Student in Medical Parasitology, Student Research Committee, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی پزشکی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران ALi Bakooie Katrimi علی باکویی کتریمی 100319475328460085521 100319475328460085521 No MSc in Veterinary Parasitology, Mazandaran Provincial Veterinary Service, Sari, Iran کارشناسی ارشد انگل شناسی دامپزشکی، اداره کل دامپزشکی استان مازندران، ساری، ایران Seyed Abdollah Hosseini سید عبدالله حسینی 100319475328460085522 100319475328460085522 No PhD Student in Medical Parasitology, Student Research Committee, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran دانشجوی دکتری انگل شناسی پزشکی، کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی مازندران، ساری، ایران