Journal of Mazandaran University of Medical Sciences
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران
J Mazandaran Univ Med Sci
Medical Sciences
http://jmums.mazums.ac.ir
1
admin
1735-9260
1735-9279
fa
jalali
1396
1
1
gregorian
2017
4
1
27
147
online
1
fulltext
fa
کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Cloning, Expression, and Purification of Recombinant Beta Subunit of Human TSH Protein and Evaluating its Antigenicity
غدد
Endocrine diseases
پژوهشي-کامل
Research(Original)
<p><strong>سابقه و هدف:</strong> اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (TSH) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های RIA و ELISA برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین TSH و سه هورمون گلیکوپروتئینی LH, FSH و CG شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین، در پژوهش حاضر سعی بر آن است که زیر واحد بتا TSH، تولید شده و از نظر آنتی ژنیسته مورد بررسی قرار می گیرد.</p>
<p><strong>مواد و روش ها:</strong> در این پژوهش تجربی، ژن<strong> </strong>TSHβ انسانی به روش نوترکیب سنتز و مراحل کولینگ، بیان و تخلیص در باکتریE.coli) Escherichia coli) انجام شد. سپس، آنتی ژنیسیته پروتئین آن با تکنیک وسترن بلات (Western Blot) علیه آنتی بادی های ضد TSH منو نوکلئان حیوانی مورد بررسی قرار گرفت.</p>
<p>یافتهها: ژن TSHβ، به درستی در میزبان باکتریایی، کلون و بیان گردید و پروتئین خالص شده با آنتی بادی اختصاصی در تکنیک وسترن بلات واکنش نشان داد.</p>
<p><strong>استنتاج: </strong>پروتئین TSHβ نوترکیب، با وجود داشتن تفاوت هایی مانند ساختار و شکل فضایی با پروتئین طبیعی آنتی ژنیسیته قابل قبولی داشت. از سوی دیگر، به نظر می رسد این پروتئین به دلیل داشتن اپی توپ های TSH بیشتر، قابلیت جایگزینشدن جهت استفاده در کیت های تشخیصی و غیره را برای افزایش اختصاصی شدن این آزمایش ها دارد.</p>
<p><strong>Background and purpose:</strong> Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the produced beta-subunit of TSH (TSHβ) in terms of antigenicity.<br>
<strong>Materials and methods:</strong> In this study, human TSHβ gene was synthesized using recombinant method. The cloning, expression, and purification were performed in Escherichia coli. Thereafter, antigenicity of the protein against antibodies against animal monoclonal TSH was evaluated using<br>
Western Blot technique.<br>
<strong>Results: </strong>TSHβ gene was cloned and expressed correctly in the bacterial host. The purified protein reacted with the specific antibody in Western Blot.<br>
<strong>Conclusion:</strong> Although recombinant TSHβ protein is different from the natural protein in some respects such as structure and spatial shape, it had acceptable antigenicity. On the other hand, it seems that this protein, due to having more TSH epitopes, can be applied in diagnostic kits to enahance the<br>
specificity of these tests.</p>
الایزا, پروتئین نوترکیب, زیرواحد بتای تیروتروپین, کلونینگ, هورمون محرک تیروئید
ELISA, molecular cloning, recombinant protein, thyroid stimulating hormone, thyrotropin beta subunit
87
96
http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4374-27&slc_lang=fa&sid=1
Hadi
Mohammadzade
هادی
محمد زاده
100319475328460084592
100319475328460084592
No
گروه زیست فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی،
Behzad
Khansarinejad
بهزاد
خوانساری نژاد
100319475328460084593
100319475328460084593
No
گروه میکروبشناسی و ایمنیشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
Abdolrahim
Sadeghi
عبدالرحیم
صادقی
100319475328460084594
100319475328460084594
No
مرکز تحقیقات غدد و متابولیسم، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران
Hamid
Abtahi
حمید
ابطحی
abtahi@arakmu.ac.ir
100319475328460084595
100319475328460084595
Yes
مرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران