fa ارزیابی روش Real-time PCR Multiplex به‌منظور شناسایی گونه‌های شایع باکتری بروسلا ميکروبيولوژي Microbiology پژوهشي-کامل Research(Original) <p dir="RTL">سابقه و هدف: بیماری بروسلوز یک بیماری مشترک انسان و دام است. با توجه به ویژگی‌هایی مانند سخت رشد بودن، خطرات مرتبط با کشت و وجود واکنش‌های متقاطع با باکتری‌های دیگر در آزمون سرولوژیک، در مطالعه حاضر روش <span dir="LTR">Real-time PCR</span> <span dir="LTR">Multiplex</span> به‌منظور شناسایی گونه‌های شایع باکتری بروسلا (<em><span dir="LTR">Brucella</span></em>) ارزیابی شد.</p> <p dir="RTL">مواد و روش‌ها: این مطالعه تجربی در دانشگاه علوم پزشکی همدان و در سال 1394 در دو مرحله بیوانفورماتیکی و آنالیتیکی صورت گرفت. در مطالعه حاضر، یک پرایمر همگانی برای شناسایی همه‌ی گونه‌های جنس بروسلا و دو پرایمر اختصاصی دیگر برای گونه‌های بروسلا ملی‌تنسیس (<em><span dir="LTR">B. melitensis</span></em>) و بروسلا آبورتوس (<em><span dir="LTR">B. abortus</span></em>) که بیشترین شیوع را دارند، طراحی شد. ژن‌های <em><span dir="LTR">ITS</span></em>، <em><span dir="LTR">BMEII-0466</span></em> و <em><span dir="LTR">BruAB2-0168</span></em> به‌عنوان ژن‌های هدف به‌ترتیب برای جنس بروسلا، بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلا آبورتوس انتخاب گردیدند. اختصاصیت و حساسیت پرایمرها نیز در مرحله آنالیتیکی ارزیابی شدند.</p> <p dir="RTL">یافته‌ها<strong>:</strong> پرایمر همگانی، جنس بروسلا را در 83 جفت باز و دمای ذوب معادل 5/82 درجه سانتی‌گراد شناسایی می‌کند. به‌طور اختصاصی، پرایمرهای بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلا آبورتوس به‌ترتیب در 121 و 285 جفت باز و دماهای ذوب معادل 84 و 87 درجه سانتی‌گراد، این باکتری‌ها را شناسایی می‌کنند. حساسیت به‌دست ‌آمده برای پرایمر همگانی و بروسلا آبورتوس، <span dir="LTR">fg</span> 50 و برای بروسلا ملی‌تنسیس <span dir="LTR">fg</span> 100 بود.</p> <p dir="RTL">استنتاج<strong>:</strong> با توجه به نتایج به‌دست‌ آمده توسط این مطالعه، پرایمرهای طراحی‌شده حساسیت و اختصاصیت قابل‌قبول و بالایی از خود نشان دادند که می‌توان برای ارزیابی آن‌ها در آزمایش‌های کلینیکی به همراه روش کشت استفاده کرد.</p> <p><strong>Background and purpose:</strong> Brucellosis is a zoonotic disease. Given that serologic test has some specific characteristics such as difficult growth, problems associated with culture, and cross-reactions with otherbacteria, in this study multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR) method was used to detect the most common species of <em>Brucella</em> spp.</p> <p><strong>Materials and methods: </strong>This experimental study was performed in Hamedan University of Medical Sciences, Hamedan, Iran, 2015, in two bioinformatical and analytical stages. A universal primer was designed to detect <em>Brucella</em> genus and two primers were prepared for <em>B. melitensis</em> and <em>B. abortus</em>, which are the most common species. The target genes for universal<em> Brucella</em>, <em>B. melitensis,</em> and <em>B. abortus</em> primers were <em>ITS</em>, <em>BMEII</em>-<em>0466,</em> and <em>BruAB2</em>-<em>0168,</em> respectively. In the analytical stage, specificity and sensitivity of the primers were evaluated.</p> <p><strong>Results: </strong>In this study, the universal primer of <em>Brucella</em> was detected in 83 bp at melt temperature of 82^∘C. Moreover, <em>B. melitensis</em> and <em>B. abortus</em> primers were specifically identified in 121 bp and 285 bp at melt tempretures of 84^∘C and 87^∘C, respectively. The sensitivity for the universal<em> Brucella</em> primer and <em>B. abortus</em> was 50 fg, while it was 100 fg for the <em>B. melitensis</em> primer.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> The identified primers revealed high levels of sensitivity and specificity. Therefore, they can be considered along with culture in clinical trials.</p> بروسلا آبورتوس, بروسلا ملی‌تنسیس, multiplex, real-time PCR B. abortus, B. melitensis, multiplex, real-time PCR 97 107 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4374-32&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Reza Arabestani محمد رضا عربستانی 100319475328460083763 100319475328460083763 No دانشیار، دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، مرکز تحقیقات بروسلوز، گروه میکروبشناسی، همدان، ایران Ali Gholami علی غلامی 100319475328460083764 100319475328460083764 No کارشناسی ارشد، دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، گروه میکروبشناسی، همدان، ایران Mohammad Yousef Alikhani محمد یوسف علیخانی alikhani43@yahoo.com 100319475328460083765 100319475328460083765 Yes استاد، دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، مرکز تحقیقات بروسلوز، گروه میکروبشناسی، همدان، ایران Nasrin Bahmani نسرین بهمنی 100319475328460083766 100319475328460083766 No دانشجوی دکترای تخصصی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، مرکز تحقیقات بروسلوز، گروه میکروبشناسی، همدان، ایران Seyed Hamid Hashemi حمید هاشمی 100319475328460083767 100319475328460083767 No استاد، دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، مرکز تحقیقات بروسلوز، گروه میکروبشناسی، همدان، ایران