دوره 25، شماره 128 - ( شهریور 1394 )                   جلد 25 شماره 128 صفحات 28-18 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


چکیده:   (8041 مشاهده)
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری‌هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می‌گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی‌بیوتیک‌ها در درمان این بیماری‌ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از آنتی‌بیوتیک‌ها شده است. لیزواستافین به عنوان یک عامل موثر و اختصاصی در درمان عفونت‌های استافیلوکوکی محسوب می‌شود. هدف از این مطالعه تولید لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD می باشد. مواد و روش‌ها: در مرحله اوّل، ساخت پلاسمید نوترکیب pBAD با استفاده از سیستم pBAD/Thio-TOPO تحت عنوان pBADLys انجام گرفت. سپس به منظور بیان ژن لیزواستافین از آزمون Reverse Transcriptase PCR استفاده گردید. در مرحله بعد، بیان لیزواستافین نوترکیب در سیستم pBAD انجام شد که بیان پروتئین با ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد القاﺀ گردید. سپس خالص سازی آنزیم با استفاده از ستون Ni-NTA agarose (Qiagene, Hilden, Germany) انجام گرفت و در نهایت بررسی فعالیت آنزیمی با استفاده از محیط مولر هینتون آگار و ایجاد هاله عدم رشد مورد بررسی قرار گرفت. یافته‌ها: با توجه به نتایج حاصل شده از PCR و تعیین توالی، پلاسمید نوترکیبpBAD با موفقیت ساخته شد. بیان پروتئین با استفاده از ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد به خوبی القاﺀ و غلظت بسیار بالایی از آنزیم نوترکیب با استفاده از سیستم کروماتوگرافی ستونی نیکل حاصل گردید. لیزواستافین نوترکیب دارای فعالیت بسیار اختصاصی بر علیه استافیلوکوکوس اورئوس می باشد. استنتاج: آنزیم لیزواستافین نوترکیب حاصل شده با استفاده از سیستم بیانی pBAD با توجه به میزان حاصل شده بسیار مقرون به صرفه از نظر هزینه می باشد و همچنین با عملکرد اختصاصی بر روی استافیلوکوکوس اورئوس بسیار موثر است.
متن کامل [PDF 260 kb]   (4426 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل | موضوع مقاله: ميکروبيولوژي

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.