fa کشت توامان سلول های بنیادی خونساز و مزانشیمی مشتق شده از خون بند ناف بر روی داربست های نانوفیبری پلی ال لاکتیک اسید بیوتکنولوژی Biotechnology پژوهشي-کامل Research(Original) <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">سابقه</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;"> و هدف:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"> امروزه سلول های بنیادی خونساز (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HSC</span></span><span style="font-family:b zar;">) خون بند ناف به دلیل مزایایی چون، در دسترس بودن، توانایی خود نوسازی، تکثیر و تمایز بسیار مورد توجه قرار گرفته اند. محدویت اصلی در استفاده از این سلول</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">ها</span><span style="font-family:b zar;">،</span><span style="font-family:b zar;"> تعداد کم آن ها </span><span style="font-family:b zar;">در واحد حجم خون بند ناف </span><span style="font-family:b zar;">می باشد. جهت غلبه بر این محدودیت، کشت توام سلول</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">های خونساز و مزانشیمی</span> <span style="font-family:b zar;">(</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MSCs</span></span><span style="font-family:b zar;"> ) مشتق از خون بند ناف یک راهکار کاربردی می باشد. این مطالعه با هدف تکثیر </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">HSC</span></span><span style="font-family:b zar;"> خون بند ناف به صورت هم</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">کشتی با سلول</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">های مزانشیمی مشتق از خون بند ناف بر روی محیط سه بعدی پلی</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">ال</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">لاکتیک اسید پوشیده شده (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA</span></span><span style="font-family:b zar;">) با پروتئین فیبرونکتین می باشد.</span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"></span></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">مواد و روش</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"> در این مطالعه تجربی، پس از جداسازی سلول های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD133+</span></span><span style="font-family:b zar;"> با استفاده از تکنیک </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MACS</span></span><span style="font-family:b zar;">، تایید خلوص سلول ها با استفاده از فلوسایتومتری انجام شد. سپس سلول ها بر روی بستر نانوالیاف </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA</span></span> <span style="font-family:b zar;">کونژوگه با فیبرونکتین (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA-Fn</span></span><span style="font-family:b zar;"> ) </span><span style="font-family:b zar;">در حضور </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MSCs</span></span> <span style="font-family:b zar;">(گروه 1)، داربست نانوفیبری </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA</span></span><span style="font-family:b zar;"> در حضور </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MSCs</span></span><span style="font-family:b zar;"> (گروه 2) و داربست </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA</span></span><span style="font-family:b zar;"> (گروه 3 ) کشت داده</span><span style="font-family:b zar;"> شدند. میزان تکثیر، قدرت کلنی‌زایی و میزان زیست سازگاری سلول ها به ترتیب با استفاده از لام هموسیتومتر، تست سنجش کلنی (</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CFU assay</span></span><span style="font-family:b zar;"> ) و تست </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MTT</span></span> <span style="font-family:b zar;">در گروه های نامبرده مورد بررسی قرار گرفت.</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">یافته</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span></span><span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">ها:</span></span></span> <span style="font-family:b zar;">سلول</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">هایی که بر روی داربست </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PLLA-Fn</span></span><span style="font-family:b zar;"> به صورت توام</span><span style="font-family:b zar;"> با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">MSCs</span></span><span style="font-family:b zar;"> کشت شدند</span><span style="font-family:b zar;"> (گروه 1</span><span style="font-family:b zar;">). </span><span style="font-family:b zar;">میزان بیشتری از نشانگر بنیادینگی</span><span style="font-family:b zar;"> +</span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD133</span></span><span style="font-family:b zar;"> را </span><span style="font-family:b zar;">نسبت به گروه های دیگر</span> <span style="font-family:b zar;">دارا می باشند</span><span style="font-family:b zar;">. همچنین قدرت کلنی‌زایی و میزان زیست سازگاری در این گروه در مقایسه با سایر گروه</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">ها،</span> <span style="font-family:b zar;">افزایش معناداری به همراه داشت (05/0 </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"><</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">P</span></span><span style="font-family:b zar;"> ).</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"></span></span><br> <span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b koodak;">استنتاج:</span></span></span><span style="font-family:b zar;"> نتایج این مطالعه، بهینه بودن سیستم کشت سه بعدی پوشش داده شده با فیبرونکتین</span> <span style="font-family:b zar;">به صورت</span><span style="font-family:b zar;"> هم کشتی با سلول های مزانشیمی را جهت تکثیر سلول</span><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;">‌</span></span><span style="font-family:b zar;">های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">CD133⁺</span></span><span style="font-family:b zar;"> با حداقل میزان تمایز اثبات نمود.<span style="letter-spacing:-.2pt;"><span style="color:black;"></span></span></span> <strong>Background and purpose:</strong> Umbilical cord blood (UCB) is a source of Hematopoietic stem cells (HSCs) and has received a lot of attention due to its availability, renewal capacity, proliferation rate, and differentiation potential. The main limitation of using these cells is their low quantity in one unite of UCB. To overcome this, HSCs co-culturing with UCB derived mesenchymal cells (MSCs) is a practical approach. The purpose of this study was the expansion of HSCs together with UCB derived MSCs on a three-dimensional poly L- lactic acid coated with fibronectin.<br> <strong>Materials and methods:</strong> In this experimental study, after isolation of CD133+ from UCB cells using MACS method, the purity of the isolated cells was carried out by flow cytometry. Then, the cells were seeded on PLLA scaffold coated with fibronectin in presence of mesenchymal cells (group I), the PLLA scaffold in presence of mesenchymal cells (group II), and PLLA scaffold (group III). The proliferation rate, colonization potential and bio-compatibility of the cells were studied using a hemocytometer, CFU assay, and MTT, respectively.<br> <strong>Results:</strong> The cells co-cuthured with PLLA-Fn scaffold (group I) had a higher proliferation rate of CD133 stemness marker compared to other groups. Also, the colonization of the cells and scaffold<span dir="RTL">׳</span>s biocompatibility was significantly higher in this group compared to other groups. (P <0.05).<br> <strong>Conclusion:</strong> The study proved that the optimal 3D culture system in PLLA scaffold coated with fibronectin co-cultured with MSCs could reproduce minimum differentiation of CD133 + cells. سلول بنیادی خونساز, سلول بنیادی مزانشیمی, هم کشتی, خون بند ناف, فیبرونکتین HSC, MSC, Co-culture, UCB, Fibronectin 1 11 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-8321-2&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Islami مریم اسلامی mahtabi2234@gmail.com 0000-0002-8739-1926 No PhD in Medical Biotechnology, Dietary Supplements and Probiotic Research Center, Alborz University of Medical Sciences, Karaj, Iran دکترای زیست فناوری، مرکز تحقیقات پروبیوتیک و مکمل های غذایی، دانشگاه علوم پزشکی البرز، البرز، ایران Masoud Soleimani مسعود سلیمانی soleim_m@modares.ac.ir 0000-0002-1598-6854 No Associate Professor, Department of Hematology and Blood Banking, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran دانشیار، گروه هماتولوژی و بانک خون، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Monireh Ajami منیره عجمی : Monireh.ajami@modares.ac.ir 0000-0002-0254-1245 No PhD Student in Hematology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran دانشجوی دکترای هماتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران Maryam Darvish مریم درویش maryam_darvish@yahoo.com 0000-0002-0929-4864 Yes Molecular Medicine Research Center, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran.Assistant Professor, Department of Medical Biotechnology, Faculty of Medicine, Arak University of Medical Sciences, Arak, Iran مرکز تحقیقات پزشکی مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران. 5. استادیار، گروه زیست فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران.