fa تولید اسید لینولئیک کانژوگه به وسیله اشریشیا کلی تراریخته پژوهشي-کامل Research(Original) <div style="text-align: justify direction: rtl"> <span style="font-weight: bold">سابقه و هدف : </span>در سال های اخیر تمایل به تولید اسید لینولئیک کانژوگه (ÇLÂ) به عنوان یکی از لیپیدهای عملگر افزایش یافته است. مصرف ÇLÂ اثرات فیزیولوژیکی سودمند زیادی دارد. به‌دلیل متفاوت بودن اثرات فیزیولوژیکی ایزومرهای گوناگون ÇLÂ تولید ایزومرهای خاص و خالص اهمیت خواهد داشت. تولید ÇLÂ به روش‌های شیمیایی و آنزیمی امکان‌پذیر می‌باشد. مزیت روش آنزیمی، عمل ویژه آنزیم‌هاست که تولید فراورده‌های ویژه و خالص را ممکن می‌سازد. در این پژوهش، لینولئیک اسید ایزومراز از Propionibacterium acnes ، در اشرشیا کلی (Ë. coli) کلون و امکان تولید ÇLÂ به وسیله آن ارزیابی شد. <br><span style="font-weight: bold">مواد و روش ها :</span> از وکتور حاوی ژن لینولئیک اسید ایزومراز (pGËX-6P-PÂÏ) در Ë. coli برای تراریخت کردن استفاده شد. غربالگری کلون‌های تراریخت شده برپایه مقاومت به آمپی‌سیلین و آنالیز هضم وکتور انجام شد. القای کلون‌های تراریخت شده برای تولید آنزیم نوترکیب با افزودن ایزوپروپیل‌بتا- تیو-گالاکتوپیرانوزید (ÏPTG) انجام شد. آزمون های الکتروفورز ژل SDS- پلی اکریلامید و وسترن بلاتینگ با آنتی‌بادی آنتی لینولئیک اسید ایزومراز بیان نوترکیب لینولئیک اسید ایزومراز را تائید کردند. پس از تائید، امکان تولید ÇLÂ از اسید لینولئیک با استفاده از Ë. coli تراریخت بررسی شد. <br> <span style="font-weight: bold">یافته ها : </span>Ë. coli تراریخته شده، لینولئیک اسید ایزومراز نوترکیب را به شکل متصل شده به دنباله گلوتاتیون S- ترانسفراز (GST) تولید کرد. افزوده شدن دنباله GST به سر N آنزیم باعث افزایش وزن ملکولی آن از 49 به 75 کیلو دالتون شد. آنزیم دارای دنباله GST در سر N خود، فعالیت لینولئیک اسید ایزومرازی داشت و باکتری تراریخت توانست مقادیر قابل توجهی ÇLÂ از اسید لینولئیک تولید کند. <br> <span style="font-weight: bold">استنتاج : </span>بر اساس نتایج به دست آمده، از سلول‌های Ë. coli تراریخت شده می‌توان به طور مناسبی برای تولید ÇLÂ در فرآیندهای بیوکاتالیز استفاده کرد. </div> <span style="font-weight: bold">Background and purpose:</span> Due to the beneficial physiological effects of conjugated linoleic acid (ÇLÂ), there has been a growing tendency to produce it as a functional lipid in recent years. Different ÇLÂ isomers have different physiological effects hence, production of certain ÇLÂ isomers with high purity is of great importance. ÇLÂ can be produced through both chemical and enzymatic methods however, unlike chemical catalysts, enzymes make it possible to produce pure ÇLÂ isomers. Ïn this study, linoleic acid isomerase from Propionibacterium acnes was expressed in Ë. coli and the possibility of the production of ÇLÂ was studied. <br><span style="font-weight: bold">Materials and methods: </span>The vector containing linoleic acid isomerase, pGËX-6P-PÂÏ, was transformed in Ë. coli . Transformants were selected based on their resistance to ampicillin and restriction digestion analysis. To express the recombinant linoleic acid isomerase, transformants were induced using isopropyl-beta-thiogalactopyranoside (ÏPTG). The expression of recombinant protein was confirmed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting using anti-linoleic acid isomerase antibody. Then, the possibility of the production of ÇLÂ from Linoleic acid by using Ë-coli transformant was investigated. <br><span style="font-weight: bold">Results:</span> Recombinant linoleic acid isomerase was intracellularly produced as a glutathione S-transferase (GST) tagged protein by transformed Ë-coli. The fusion of GST to the N-terminus of linoleic acid isomerase increased its molecular weight from 49 to 75 kDa. GST-tagged enzyme acted like linoleic acid isomerase and the transformed bacterium could convert considerable amounts of linoleic acid to ÇLÂ. <br><span style="font-weight: bold">Çonclusion: </span>The findings indicated that transformed Ë. coli can be used for ÇLÂ production in biocatalytic processes. اسید لینولئیک کانژوگه، لینولئیک اسید ایزومراز، اشریشیاکلی، Propionibacterium acnes Çonjugated linoleic acid (ÇLÂ), linoleic acid isomerase, Ë. coli, Propionibacterium acnes 37 46 http://jmums.mazums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-31-21&slc_lang=fa&sid=1 J Farmani جمشید فرمانی 10031947532846003757 10031947532846003757 No M Safari محمد صفری 10031947532846003758 10031947532846003758 No F Roohvand فرزین روحوند farzin.roohvand@gmail.com 10031947532846003759 10031947532846003759 Yes M.R Aghasadeghi محمد رضا آقا صادقی 10031947532846003760 10031947532846003760 No S.H Razavi سید هادی رضوی 10031947532846003761 10031947532846003761 No F Motevalli فاطمه متولی 10031947532846003762 10031947532846003762 No