آزاده میزانی، پوریا گیل، شهاب الدین سروی، احمد دریانی، مهدی شریف، افسانه عمویی، علی باکویی کتریمی، سید عبدالله حسینی،
دوره ۲۶، شماره ۱۴۵ - ( بهمن ۱۳۹۵ )
سابقه و هدف: فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا فلوکهای کبدی شایعی بوده که روی انسانها و دامها در تمام نقاط جهان اثرگذار هستند. در مطالعه حاضر ما تکنیک سریع loop-mediated isothermal amplification (LAMP) را در تشخیص و افتراق گونههای فاسیولا ارزیابی نمودیم.
مواد و روشها: تعداد ۵۰ کرم فاسیولا از کبد گاو و گوسفند کشتارگاههای استان مازندران جداسازی شدند. تعداد ۸ پرایمر جهت تکثیر ناحیه ژنی ۲۸S ribosomal RNA برای واکنش LAMP برای گونههای فاسیولا طراحی گردید. واکنش LAMP در حجم µI ۲۰ تحت شرایط تک دمایی در۰C ۶۰ به مدت ۹۰ دقیقه انجام گرفت. نتایج تکثیر با دیدن رسوب با استفاده از چشم غیر مسلح، استفاده از رنگ فلوئورسانس و ژل الکتروفورز بررسی شد. اختصاصیت روش LAMP برای فاسیولا با استفاده از DNA انگلهای دیکروسلیوم دندریتیکم، تریکواسترونژیلوس کالابریفورمیس و اکینوکوکوس گرانولوزوس مورد سنجش قرار گرفت. جهت ارزیابی محدودیت تشخیص روش LAMP برای تعیین جنس فاسیولا رقت سریالی از DNA استخراج شده مورد استفاده قرار گرفت.
یافتهها: واکنش مثبت LAMP با استفاده از پرایمرهای اختصاصی دو گونه تعداد زیادی باند در سایزهای متفاوت در دمای ۰C۶۰ طی مدت ۹۰ دقیقه تولید نمود. شرایط مطلوبی بدون هیچ واکنشی با سایر DNA انگلها ایجاد گردید. محدودیت تشخیص روش LAMP تا pg ۱ تعیین گردید. نتایج تشخیص رسوب و رنگ فلوئورسانس با الکتروفورز با ژل آگارز همخوانی داشتند.
استنتاج: نتایج ما نشان دادند که روش LAMP یک روش سریع، آسان، کم هزینه با اختصاصیت بالا و معتبر جهت افتراق گونههای فاسیولا در مطالعات اپیدمیولوژیکی و بالینی فاسیولوزیس انسانی و دامی در مناطق اندمیک میباشد.