سمیه تیربخش گوران، عباس دوستی، محمدسعید جامی،
دوره ۳۲، شماره ۲۱۷ - ( بهمن ۱۴۰۱ )
چکیده
سابقه و هدف: در تمام گونههای باکتری بروسلا، توالی ژن Omp۲۵ حفاظت شده است. خاصیت آنتی ژنیسیته بالای محصول این ژن باعث تحریک سیستم ایمنی میزبان میشود. استفاده از باکتری پروبیوتیک مهندسی شده، روش مناسبی برای انتقال واکسن است. این مطالعه با هدف بیان Omp۲۵ باکتری بیماریزای بروسلا آبورتوس در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس، انجام پذیرفت.
مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، وکتور مورد نظر به همراه ژن و سیگنال پپتید (pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵) طراحی و سنتز گردید. باکتری E. coli سویه TOP۱۰F با وکتور بیانی pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ مبتنی بر القا توسط نیسین ترانسفورم شد. با استفاده از کیت استخراج پلاسمید، از باکتریهای ترانسفورم شده پلاسمید نوترکیب استخراج گردید. ترانسفورماسیون باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس با وکتور pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵، توسط روش الکتروپوریشن انجام گرفت. بررسی بیان ژن Omp۲۵ در سطح RNA، به روش رونوشتبرداری معکوس و تایید حضور پروتئین نوترکیب Omp۲۵ در باکتری مهندسی شده با روش ، ارزیابی شد.
یافتهها: بیان موفقیتآمیز پروتئین Omp۲۵بروسلا آبورتوس در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس با RT-PCR تأیید شد. با استفاده از روش سدیم دودسیل سولفات- پلیآکریل آمید ژل الکتروفورز (SDS-PAGE)، پروتئینها براساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک شدند .آنالیز بیان پروتئینها، بیانOmp۲۵ را به صورت یک باند پروتئینی ۲۵ کیلو دالتونی اضافه در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ در مقایسه با لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pNZ۸۱۴۸ (وکتور فاقد ژن هدف) نشان داد.
استنتاج: مطالعه حاضر نشان داد که پروتئین Omp۲۵ در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده توسط الکتروپوریشن با وکتور نوترکیب pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ بیان میشود. باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده، میتواند در مطالعات آینده بهعنوان واکسن زیر واحدی خوراکی جهت پیشگیری از بروسلوز، مناسب باشد.