شعبانعلی خداشناس لیمونی، فاطمه سلیمی، مهدی فروزنده مقدم،
دوره ۲۷، شماره ۱۵۱ - ( ۵-۱۳۹۶ )
چکیده
سابقه و هدف: سلول‌های زنده به‌منظور ارتباط با محیط اطرافشان نانوذرات اگزوزومی آزاد می‌کنند.امروزه اگزوزوم به عنوان حامل دارو در تحقیقات مطرح است. این ذرات را می‌توان با بیان لیگاند مخصوص سرطان/بیماری هدفمند ساخت. پروتئین اتصالی غشا LAMP که در اگزوزوم بیان می‌شود بهترین انتخاب به عنوان نگهدارنده لیگاندی است که می‌تواند به رسپتورهای اختصاصی سلول هدف متصل گردد. هدف از این مطالعه طراحی وکتور لنتی ویروسی بوده است که حامل ژن کایمر جهت بیان پروتئین کایمر LAMP-DARPin در سطح اگزوزوم برای اتصال به گیرنده‌های HER۲ در سطح سلول‌های سرطانی است.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی با RNA استخراج شده از ماهیچه اسکلتی موش cDNA سنتز گردید وبا پرایمرهای اختصاصی، ژن LAMP۲b تکثیر گردید. با روش SOEing PCR دو سایت برش بین توالی کد‌کننده سیگنال پپتید وپپتید بالغ ایجاد شد وسپس در وکتور لنتی ویروسی pLEX کلون شد. ژن دارپین طراحی ،اپتیمایز ، سنتزودر وکتور pLEX-LAMP بین توالی سیگنال وپپتید بالغ کلون شد و کلونیگ با colony-PCR با تعیین توالی تایید شد.
یافته‌ها: ژل الکتروفورز محصول واکنش SOEing PCR، بیان‌گرتکثیر بخش کد‌کننده ژن LAMP۲b است. بعد از کلونیگ وجداسازی پلاسمید از کلون‌های مثبت ،تعیین توالی انجام شد که بلاست توالی در NCBI تایید کننده توالی ژن LAMP۲b است.هم‌چنین ورود توالی دارپین بین توالی پپتید سیگنال و پپتید بالغ به‌وسیله الکتروفورز وتوالی‌یابی تایید شد.
استنتاج: در این مطالعه وکتور لنتی ویروسی PLEX LAMP-DARPin طراحی گردید که با کمک آن می‌توان لیگاند دارپین را جهت هدفگیری سلول‌های سرطا نی HER۲ مثبت در سطح اگزوزوم بیان نمود.
mazums.ac.ir