دوره 25، شماره 128 - ( شهریور 1394 )
جلد 25 شماره 128 صفحات 28-18 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Mordadi A, Haji Ahmadi F, Soleimani Asl S, Arabestani M R, Szweda P. Cloning, Expression, Purification and Evaluation of Recombinant Lysostaphin using pBAD Cloning System. J Mazandaran Univ Med Sci 2015; 25 (128) :18-28
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-6115-fa.html
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-6115-fa.html
مردادی علیرضا، حاجی احمدی فهیمه، سلیمانی اصل سارا، عربستانی محمدرضا، ژودا پیوتر. کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. 1394; 25 (128) :18-28
چکیده: (8460 مشاهده)
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری‌هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می‌گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی‌بیوتیک‌ها در درمان این بیماری‌ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از آنتی‌بیوتیک‌ها شده است. لیزواستافین به عنوان یک عامل موثر و اختصاصی در درمان عفونت‌های استافیلوکوکی محسوب می‌شود. هدف از این مطالعه تولید لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD می باشد.
مواد و روش‌ها: در مرحله اوّل، ساخت پلاسمید نوترکیب pBAD با استفاده از سیستم pBAD/Thio-TOPO تحت عنوان pBADLys انجام گرفت. سپس به منظور بیان ژن لیزواستافین از آزمون Reverse Transcriptase PCR استفاده گردید. در مرحله بعد، بیان لیزواستافین نوترکیب در سیستم pBAD انجام شد که بیان پروتئین با ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد القاﺀ گردید. سپس خالص سازی آنزیم با استفاده از ستون Ni-NTA agarose (Qiagene, Hilden, Germany) انجام گرفت و در نهایت بررسی فعالیت آنزیمی با استفاده از محیط مولر هینتون آگار و ایجاد هاله عدم رشد مورد بررسی قرار گرفت.
یافته‌ها: با توجه به نتایج حاصل شده از PCR و تعیین توالی، پلاسمید نوترکیبpBAD با موفقیت ساخته شد. بیان پروتئین با استفاده از ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد به خوبی القاﺀ و غلظت بسیار بالایی از آنزیم نوترکیب با استفاده از سیستم کروماتوگرافی ستونی نیکل حاصل گردید. لیزواستافین نوترکیب دارای فعالیت بسیار اختصاصی بر علیه استافیلوکوکوس اورئوس می باشد.
استنتاج: آنزیم لیزواستافین نوترکیب حاصل شده با استفاده از سیستم بیانی pBAD با توجه به میزان حاصل شده بسیار مقرون به صرفه از نظر هزینه می باشد و همچنین با عملکرد اختصاصی بر روی استافیلوکوکوس اورئوس بسیار موثر است.
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل |
موضوع مقاله:
ميکروبيولوژي
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
Articles Copyright © The Author(s). Owned by Mazandaran University of Medical Sciences.
تماس با ما
ساری- میدان معلم- ساختمان شماره2 دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی مازندران- طبقه سوم- معاونت تحقیقات و فناوری- دفترمجله
تلفن: 01134484874
پست الکترونیکی : jmums
mazums.ac.ir
