نسیم حافظی، ابوالقاسم عجمی، رضا ولدان،
دوره ۲۹، شماره ۱۷۲ - ( اردیبهشت ۱۳۹۸ )
چکیده
سابقه و هدف: آنزیم Activation-induced cytidine deaminase (AID) یک آنزیم اختصاصی لنفوسیت‌هایB در هایپرموتاسیون سوماتیک و نوترکیبی تعویض کلاس ژن‌های آنتی‌بادی در فولیکول های لنفوسیت B ارگان های لنفاوی محیطی می‌باشد. بیان نا به جای این آنزیم منجر به موتاسیون در سلول‌های غیر از لنفوسیت‌های B و حتی در باکتری Escherichia coli شده است. با این وجود، القای موتاسیون در باکتری Escherichia coli توسط بیان آنزیم AID، نیازمند بهینه سازی شرایط مطلوب و کنترل شده می باشد. بنابراین هدف این مطالعه تولید یک پلاسمید بیانی AID تحت کنترل پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا می‌باشد.
مواد و روش‌ها: در مرحله اول، جداسازی ژن AID از پلاسمید نوترکیب PGEMT حاوی AID انجام شد. ژن تخلیص شده در پلاسمید PTG۱۹-T در باکتری E.coli سوش Top۱۰ کلون شد و سپس در یک پلاسمید بیانی القایی با دما حاوی پروموتر چپ باکتریوفاژ لامبدا و رپرسور حساس به حرارت cI۸۵۷ منتقل و در باکتری E.coli قرار داده شد. در مرحله آخر، ژن مقاومت به تتراسایکلین جایگزین ژن مقاومت این پلاسمید نوترکیب شد.
یافته‌ها: ژن AID در پلاسمید حاوی رپرسور حساس به حرارت cI۸۵۷ از باکتریوفاژ لامبدا انتقال یافت. صحت توالی و چارچوب خوانش توسط الکتروفورز محصولPCR، استفاده از روش‌های هضم آنزیمی وهمچنین تعیین توالی ژنAID، تایید شد.
استنتاج: ژن AID به‌طور موفقیت‌آمیزی در پلاسمید حاوی پروموتر حساس به حرارت از باکتریوفاژ لامبدا کلون شد. این پلاسمید نوترکیب می تواند در سویه های مختلف باکتریE.coli جهت تولید سویه های mutator استفاده شود.
mazums.ac.ir