دوره 22، شماره 97 - ( بهمن 1391 )
جلد 22 شماره 97 صفحات 157-148 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Rostami H, Moosavi S J, Ebrahimi F, Hajizadeh A. Cloning and Expression of the Catalytic Domain of Botulinum Neurotoxin Type E in E. coli. J Mazandaran Univ Med Sci 2013; 22 (97) :148-157
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-1781-fa.html
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-1781-fa.html
رستمی حسین، موسوی سید جعفر، ابراهیمی فیروز، حاجی زاده عباس. همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. 1391; 22 (97) :148-157
چکیده: (10716 مشاهده)
سابقه و هدف: باکتری‌های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می‌کنند که تیپ‌های A، B، E و F منجر به بوتولیسم در انسان می‌شوند. یکی از روش‌های درمانی بوتولیسم می‌تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده‌ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در وکتور بیانی pET28a همسانه‌سازی و در باکتری میزبان E. coli سویه BL21(DE3) بیان شده است.
مواد و روش‌ها: به منظور همانندسازی ناحیه مورد نظر، DNA ژنومی باکتری استخراج گردید. با استفاده از واکنش PCR توالی مورد نظر تکثیر شد. سپس محصول PCR در وکتور pGEM-T Easy وارد و وکتور نوترکیب به سلول‌های میـزبان E. coli سویه DH5α منتقل گردید. سپس با واکنش الحاق محصول همسانه‌سازی شده از وکتور pGEM-T Easy به وکتور بیانی pET28a منتقـل شد. در نهایت پلاسمیـد نوترکیب pET28a به باکتـری E. coli سویه BL21(DE3) انتقال داده شد. بیان ناحیه کاتالیتیک در شرایط استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت.
یافته ها: نتایج حاصل از برش آنزیمی و واکنش PCR بیانگر همانندسازی و زیر همانندسازی به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a بود. نتایج تعیین توالی نیز صحت حضور توالی مورد نظر را تأیید کرد. در نهایت بیان قطعه مورد مطالعه، با استفاده از ژل SDS-PAGE و آزمایش وسترن بلات تأیید گردید.
استنتاج: همسانه‌سازی توالی مورد مطالعه، به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a با صحت کامل انجام گرفت. همچنین نتایج بیان و تأیید محصول بیانی در باکتری E. coli BL21(DE3) بیانگر صحت بیان محصول مورد نظر بود.
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل |
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
Articles Copyright © The Author(s). Owned by Mazandaran University of Medical Sciences.
تماس با ما
ساری- میدان معلم- ساختمان شماره2 دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی مازندران- طبقه سوم- معاونت تحقیقات و فناوری- دفترمجله
تلفن: 01134484874
پست الکترونیکی : jmums
mazums.ac.ir
