دوره 22، شماره 97 - ( بهمن 1391 )                   جلد 22 شماره 97 صفحات 157-148 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Rostami H, Moosavi S J, Ebrahimi F, Hajizadeh A. Cloning and Expression of the Catalytic Domain of Botulinum Neurotoxin Type E in E. coli. J Mazandaran Univ Med Sci 2013; 22 (97) :148-157
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-1781-fa.html
رستمی حسین، موسوی سید جعفر، ابراهیمی فیروز، حاجی زاده عباس. همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. 1391; 22 (97) :148-157

URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-1781-fa.html

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli
حسین رستمی ، سید جعفر موسوی ، فیروز ابراهیمی ، عباس حاجی زاده
چکیده:   (10044 مشاهده)
سابقه و هدف: باکتری‌های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می‌کنند که تیپ‌های A، B، E و F منجر به بوتولیسم در انسان می‌شوند. یکی از روش‌های درمانی بوتولیسم می‌تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده‌ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در وکتور بیانی pET28a همسانه‌سازی و در باکتری میزبان E. coli سویه BL21(DE3) بیان شده است. مواد و روش‌ها: به منظور همانندسازی ناحیه مورد نظر، DNA ژنومی باکتری استخراج گردید. با استفاده از واکنش PCR توالی مورد نظر تکثیر شد. سپس محصول PCR در وکتور pGEM-T Easy وارد و وکتور نوترکیب به سلول‌های میـزبان E. coli سویه DH5α منتقل گردید. سپس با واکنش الحاق محصول همسانه‌سازی شده از وکتور pGEM-T Easy به وکتور بیانی pET28a منتقـل شد. در نهایت پلاسمیـد نوترکیب pET28a به باکتـری E. coli سویه BL21(DE3) انتقال داده شد. بیان ناحیه کاتالیتیک در شرایط استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت. یافته ها: نتایج حاصل از برش آنزیمی و واکنش PCR بیانگر همانندسازی و زیر همانندسازی به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a بود. نتایج تعیین توالی نیز صحت حضور توالی مورد نظر را تأیید کرد. در نهایت بیان قطعه مورد مطالعه، با استفاده از ژل SDS-PAGE و آزمایش وسترن‌ بلات تأیید گردید. استنتاج: همسانه‌سازی توالی مورد مطالعه، به ترتیب در وکتورهای pGEM-T Easy و pET28a با صحت کامل انجام گرفت. همچنین نتایج بیان و تأیید محصول بیانی در باکتری E. coli BL21(DE3) بیانگر صحت بیان محصول مورد نظر بود.
واژه‌های کلیدی: نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E، ناحیه کاتالیتیک، همسانه‌سازی، بیان
متن کامل [PDF 307 kb]   (3246 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل |
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2024 CC BY-NC 4.0 | Journal of Mazandaran University of Medical Sciences

Designed & Developed by : Yektaweb