دوره ۳۴، شماره ۲۳۲ - ( اردیبهشت ۱۴۰۳ )
جلد ۳۴ شماره ۲۳۲ صفحات ۴۹-۳۸ |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Majdani R, Zamanifar M, Lamakan H. Isolation and Characterization of Effective Lytic Bacteriophages to Control the Antibiotic Resistant Klebsiella Pneumoniae Infections in Noth-West of Iran. J Mazandaran Univ Med Sci 2024; 34 (232) :38-49
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-19411-fa.html
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-19411-fa.html
مجدانی راحله، زمانی فر منصور، لامکان حمیده. جداسازی و بررسی خصوصیات باکتریوفاژهای لیتیک موثر جهت کنترل عفونت‌های حاصل از باکتری‌های کلبسیلا پنومونیه مقاوم به آنتی‌بیوتیک در شمال غرب ایران. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. ۱۴۰۳; ۳۴ (۲۳۲) :۳۸-۴۹
چکیده: (۱۳۴۴ مشاهده)
سابقه و هدف: با ظهور باکتری‌های مقاوم به آنتی‌بیوتیک، یافتن مواد ضد‌میکروبی جایگزین موثر برای مبارزه با این باکتری‌ها اجتناب‌ناپذیر می‌باشد. باکتریوفاژ‌درمانی به‌عنوان یک رهیافت بیولوژیک دارای پتانسیل درمانی بالا اخیرا در این زمینه مورد توجه قرار گرفته است. این مطالعه با هدف جداسازی باکتریوفاژهای لیتیک علیه جدایه‌های بالینی کلبسیلا پنومونیه دارای مقاومت‌های چندگانه آنتی‌بیوتیکی و ارزیابی خصوصیات زیستی و شکلی آن‌ها به‌عنوان کاندیداهایی برای فاژ درمانی، انجام پذیرفت.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه توصیفی- مقطعی، جدایه‌های بالینی به‌دست آمده از بیمارستان شهید مدنی شهر تبریز با استفاده از تست‌های استاندارد بیوشیمیایی به‌عنوان کلبسیلا پنومونیه تایید شدند و سنجش حساسیت آنتی‌بیوتیکی آن‌ها با استفاده از روش استاندارد انتشار از دیسک انجام شد. سپس جداسازی باکتریوفاژهای لیتیک علیه 16 جدایه باکتریایی مقاوم به آنتی‌بیوتیک صورت گرفت. به‌طور خلاصه نمونه‌های آب اخذ شده جهت جداسازی فاژ از فاضلاب سانتریفیوژ گردید. مایع رویی با فیلتر 45/0 میکرومتر فیلتر شد و با محیط کشت تریپتون سوی براث تازه و سولفات منیزیم مخلوط شد و در دمای اتاق انکوبه‌گردید. سپس محلول موردنظر با کلروفورم مخلوط شده و ارزیابی تولید پلاک با استفاده از روش آگار دو لایه انجام شد. ژنوم باکتریوفاژ با استفاده از آنزیم‌های HindIII و EcoRV تحت روند آنالیز مولکولی قرار گرفت. تعیین طیف میزبانی فاژهای جداسازی شده با استفاده از روش نقطه‌ای و آگار دو لایه انجام گرفت. سه باکتریوفاژ دارای طیف میزبانی وسیع‌تر برای بررسی بیش‌تر خصوصیات آن‌ها انتخاب شدند. منحنی رشد یک مرحله‌ای فاژها ترسیم گردید و زمان نهفته و سایز انفجاری آن‌ها مشخص شد سپس پایداری و زنده مانی باکتریوفاژهای لیتیک در برابر دماهای مختلف (20، 37-، 50 درجه سلسیوس)، محدوده‌های مختلف pH (3، 4، 5، 7، 9، 11و12) و هم‌چنین تشعشع UV بررسی گردید. در نهایت خصوصیات شکلی باکتریوفاژ دارای بیش‌ترین طیف میزبانی (PKpMa2/20) با استفاده از میکروسکوپ الکترونی مشخص شد.
یافته‌ها: 36 جدایه بالینی باکتریایی براساس تست‌های استاندارد بیوشیمیایی به‌عنوان کلبسیلا پنومونیه تایید تشخیص شدند. در آزمایش سنجش حساسیت آنتی‌بیوتیکی باکتری‌ها به ترتیب بیش‌ترین و کم‌ترین مقاومت آنتی‌بیوتیکی نسبت به سفازولین (80 درصد) و توبرامایسین (26 درصد) مشاهده گردید. سپس جداسازی باکتریوفاژها علیه همه 16 جدایه منتخب با موفقیت انجام شد. بعد از استخراج ژنوم فاژهای جدا شده تنوع توالی بالایی مشخص گردید. در مورد تعیین طیف میزبانی، PKpMa2/20 دارای اثر کشندگی روی 11 جدایه از 16 جدایه مذکور بود. در مطالعه منحنی رشد یک مرحله‌ای سه فاژ دارای طیف میزبانی بیش‌تر، زمان نهفته سه فاژ جداشده به‌ترتیب 10، 10 و 15 دقیقه و سایز انفجاری آن‌ها به ترتیب 350، 210 و 180 برای PKpMa2/20، P8 و P10 ارزیابی گردید. هر سه فاژ پایداری خوبی در دمای بین 20- و 37 درجه سلسیوس نشان دادند. در دمای 50 درجه سلسیوس اثر لیتیک فاژ PKpMa2/20 بیش‌تر از دو فاژ دیگر بود. فاژ PKpMa2/20 در بازه pH بین 3 تا 12 فعال بود در حالی که دو فاژ دیگر در میزان pH برابر با 3 کاملا از بین رفتند. در بررسی میکروسکوپ الکترونی، باکتریوفاژ PKpMa2/20 یک دم کوتاه با طول 10 نانومتر و یک سر با قطر 60 نانومتر داشت که احتمالا متعلق به خانواده پودوویریده بود.
استنتاج: با توجه به اثرات لیتیک مناسب و نیز زمان نهفته و سایز انفجاری خوب سه فاژ منتخب جدا شده در این مطالعه به خصوص (PKpMa2/20) و هم‌چنین پایداری مناسب آن‌ها در برابر دماهای مختلف و محدوده pH مختلف و نیز تشعشع UV، این فاژها می‌توانند به‌عنوان کاندیدا جهت استفاده در فاژ درمانی برای کنترل سویه‌های مقاوم کلبسیلا پنومونیه عفونی مورد توجه قرار گیرند، اما جهت استفاده درمانی نیاز به تجزیه و تحلیل مولکولی بیش‌تری می‌باشد.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه توصیفی- مقطعی، جدایه‌های بالینی به‌دست آمده از بیمارستان شهید مدنی شهر تبریز با استفاده از تست‌های استاندارد بیوشیمیایی به‌عنوان کلبسیلا پنومونیه تایید شدند و سنجش حساسیت آنتی‌بیوتیکی آن‌ها با استفاده از روش استاندارد انتشار از دیسک انجام شد. سپس جداسازی باکتریوفاژهای لیتیک علیه 16 جدایه باکتریایی مقاوم به آنتی‌بیوتیک صورت گرفت. به‌طور خلاصه نمونه‌های آب اخذ شده جهت جداسازی فاژ از فاضلاب سانتریفیوژ گردید. مایع رویی با فیلتر 45/0 میکرومتر فیلتر شد و با محیط کشت تریپتون سوی براث تازه و سولفات منیزیم مخلوط شد و در دمای اتاق انکوبه‌گردید. سپس محلول موردنظر با کلروفورم مخلوط شده و ارزیابی تولید پلاک با استفاده از روش آگار دو لایه انجام شد. ژنوم باکتریوفاژ با استفاده از آنزیم‌های HindIII و EcoRV تحت روند آنالیز مولکولی قرار گرفت. تعیین طیف میزبانی فاژهای جداسازی شده با استفاده از روش نقطه‌ای و آگار دو لایه انجام گرفت. سه باکتریوفاژ دارای طیف میزبانی وسیع‌تر برای بررسی بیش‌تر خصوصیات آن‌ها انتخاب شدند. منحنی رشد یک مرحله‌ای فاژها ترسیم گردید و زمان نهفته و سایز انفجاری آن‌ها مشخص شد سپس پایداری و زنده مانی باکتریوفاژهای لیتیک در برابر دماهای مختلف (20، 37-، 50 درجه سلسیوس)، محدوده‌های مختلف pH (3، 4، 5، 7، 9، 11و12) و هم‌چنین تشعشع UV بررسی گردید. در نهایت خصوصیات شکلی باکتریوفاژ دارای بیش‌ترین طیف میزبانی (PKpMa2/20) با استفاده از میکروسکوپ الکترونی مشخص شد.
یافته‌ها: 36 جدایه بالینی باکتریایی براساس تست‌های استاندارد بیوشیمیایی به‌عنوان کلبسیلا پنومونیه تایید تشخیص شدند. در آزمایش سنجش حساسیت آنتی‌بیوتیکی باکتری‌ها به ترتیب بیش‌ترین و کم‌ترین مقاومت آنتی‌بیوتیکی نسبت به سفازولین (80 درصد) و توبرامایسین (26 درصد) مشاهده گردید. سپس جداسازی باکتریوفاژها علیه همه 16 جدایه منتخب با موفقیت انجام شد. بعد از استخراج ژنوم فاژهای جدا شده تنوع توالی بالایی مشخص گردید. در مورد تعیین طیف میزبانی، PKpMa2/20 دارای اثر کشندگی روی 11 جدایه از 16 جدایه مذکور بود. در مطالعه منحنی رشد یک مرحله‌ای سه فاژ دارای طیف میزبانی بیش‌تر، زمان نهفته سه فاژ جداشده به‌ترتیب 10، 10 و 15 دقیقه و سایز انفجاری آن‌ها به ترتیب 350، 210 و 180 برای PKpMa2/20، P8 و P10 ارزیابی گردید. هر سه فاژ پایداری خوبی در دمای بین 20- و 37 درجه سلسیوس نشان دادند. در دمای 50 درجه سلسیوس اثر لیتیک فاژ PKpMa2/20 بیش‌تر از دو فاژ دیگر بود. فاژ PKpMa2/20 در بازه pH بین 3 تا 12 فعال بود در حالی که دو فاژ دیگر در میزان pH برابر با 3 کاملا از بین رفتند. در بررسی میکروسکوپ الکترونی، باکتریوفاژ PKpMa2/20 یک دم کوتاه با طول 10 نانومتر و یک سر با قطر 60 نانومتر داشت که احتمالا متعلق به خانواده پودوویریده بود.
استنتاج: با توجه به اثرات لیتیک مناسب و نیز زمان نهفته و سایز انفجاری خوب سه فاژ منتخب جدا شده در این مطالعه به خصوص (PKpMa2/20) و هم‌چنین پایداری مناسب آن‌ها در برابر دماهای مختلف و محدوده pH مختلف و نیز تشعشع UV، این فاژها می‌توانند به‌عنوان کاندیدا جهت استفاده در فاژ درمانی برای کنترل سویه‌های مقاوم کلبسیلا پنومونیه عفونی مورد توجه قرار گیرند، اما جهت استفاده درمانی نیاز به تجزیه و تحلیل مولکولی بیش‌تری می‌باشد.
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل |
موضوع مقاله:
ميکروبيولوژي
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
Articles Copyright © The Author(s). Owned by Mazandaran University of Medical Sciences.
تماس با ما
ساری- میدان معلم- ساختمان شماره2 دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی مازندران- طبقه سوم- معاونت تحقیقات و فناوری- دفترمجله
تلفن: 01134484874
پست الکترونیکی : jmums
mazums.ac.ir
