چکیده

سابقه و هدف: باکتری E. coliO157:H7 جزء پاتوژن‌های روده‌ای می‌باشد که آسیب‌های جدی در دستگاه گوارش پدید می‌آورد. اتصال باکتری در روده بزرگ به واسطه یک سری از فاکتورهای بیماری زا صورت می‌پذیرد که پروتئین‌های ترشحی نوع 3 نیز جزء این فاکتورها دسته‌بندی می‌شوند. در بین پروتئین‌های موجود در سیستم مذکور، پروتئین EspA نقش اصلی و مهم را در پیکره شکل‌گیری این سیستم ایفا می‌کند. هدف از انجام این تحقیق همسان‌سازی و بیان این پروتئین به شکل نوترکیب جهت دستیابی به یک ساختار و منبع پایدار برای تولید آن به منظور بررسی‌های آینده به عنوان کاندید واکسن می‌باشد.

مواد و روش‌ها: طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن espA توسط نرم‌افزار Oligo 7 انجام شد و تکثیر ژن توسط واکنش PCR از روی DNA الگو صورت پذیرفت. واکنش‌های هضم آنزیمی و الحاق ژن درون وکتور بیانی pET28a(+) انجام شد. پس از تأیید همسان سازی ژن مورد نظر، بیان نوترکیب پروتئین EspA با استفاده از القاءگر مصنوعی IPTG صورت پذیرفت. آنالیز وسترن بلات نیز برای تأیید پروتئین EspA صورت پذیرفت.

یافته‌ها: همسان سازی ژن espA درون وکتور pET28a(+) به شکل مناسب بین جایگاه های مربوطه صورت پذیرفت و پروتئین EspA پس از القا، بیان نوترکیب مناسب و قابل توجهی را نشان داد. آنتی‌بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی EspA را شناسایی کند.

استنتاج: ساختار نوترکیب پایدار محتوی ژن espA تولید گردید که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین را نشان داد. بنابراین پروتئین EspA را می‌توان در مطالعات آینده برای بررسی میزان ایمن‌سازی علیه E. coli O157:H7 مورد بررسی قرار داد.