Mendeley  

Zotero  

valadan R, Rafiei A, Hashemitabr G, Bassami M R. Protein A-Specific Enrichment of Insert-containing Phage in Antibody Phage Display Library. J Mazandaran Univ Med Sci 2015; 24 (120) :43-53
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-4854-fa.html

سابقه و هدف: تکنیک کتابخانه آنتی‌بادی فاژ یکی از قدرتمندترین روش‌های ساخت قطعات آنتی‌بادی در محیط آزمایشگاه است. با این حال یکی از مشکلات تکنیکی در مسیر انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی و عملکردی وجود فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی در کتابخانه آنتی‌بادی فاژ است. هدف از این مطالعه استفاده از قابلیت اتصال کلون‌های موجود در کتابخانه آنتی‌بادی فاژ به پروتئین A برای خالص‌سازی فیزیکی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی از فاژهای فاقد قطعه آنتی‌بادی است. مواد و روش‌ها: کتابخانه آنتی‌بادی فاژ Tomlinson طبق پروتکل مربوطه تکثیر شد. انتخاب آنتی‌بادی علیه گیرنده HER2 در سطح سلول VERO انجام شد. سه چرخه panning در دو گروه صورت گرفت به صورتی که در یک گروه قبل از هر چرخه panning فاژهای تولید شده به‌وسیله پروتئین A متصل به آگاروز خالص‌سازی شدند، در حالی که در گروه کنترل مرحله خالص‌سازی با پروتئین A صورت نگرفت. آنتی‌بادی‌های به دست آمده در انتهای هر چرخه در دو گروه مورد مطالعه به‌وسیله PCR و phage-ELISA مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج آزمون PCR نشان‌دهنده افزایش قابل‌ملاحظه تعداد فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی پس از خالص‌سازی توسط پروتئین A در انتهای چرخه سوم panning (87 درصد) نسبت به گروه کنترل (41 درصد) است. بعلاوه نتایج آزمون الیزا نیز تأیید انتخاب و تکثیر اختصاصی آنتی‌بادی در گروه فاژ خالص شده با پروتئین A است. استنتاج: این مطالعه اهمیت خالص‌سازی فاژهای حاوی قطعه آنتی‌بادی را برای تولید و انتخاب آنتی‌بادی‌های اختصاصی را در تکنیک کتابخانه آنتی‌بادی فاژ نشان می‌دهد.