دوره 25، شماره 132 - ( دی 1394 )                   جلد 25 شماره 132 صفحات 62-73 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Abdi B, Jamei R, Imani M. Optimization of Sea Anemone Toxin (fragaceatoxin C) Expression in E.coli BL21. J Mazandaran Univ Med Sci. 2016; 25 (132) :62-73
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-6735-fa.html
عبدی بابک، جامعی رشید، ایمانی مهدی. بهینه‌سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین C) در باکتری E.coli سویه BL21. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران . 1394; 25 (132) :62-73

URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-6735-fa.html


چکیده:   (2746 مشاهده)

سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره‌ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه‌های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین C را جهت دفاع و شکار ترشح می‌کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین C به اشیرشیاکلی سویه BL21، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان می‌باشد.

مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتری‌ها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن FraC به‌وسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری‌ها روی محیط حاوی آنتی‌بیوتیک مناسب (آمپی‌سیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش‌تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید GF-1 صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیم‌های NcoI وHind ІІІ  و هم‌چنین کنترل PCR قرار گرفتند. بعد از تأیید حضور پلاسمید حاوی ژن FraC در باکتری میزبان، باکتری‌ها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین FraC توسط IPTG 1mM در زمان‌های مختلف و دمای cº20 القا شدند. پس از جمع‌آوری باکتری‌های بیان‌کننده FraC در زمان‌های مختلف، بیان آن‌ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلی‌آکریل آمید(SDS-PAGE)  مشهود بود.

یافته‌ها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن FraC با موفقیت انتقال یافت. هم‌چنین نتایج SDS-PAGE نشان داد که FraC در زمان‌های 6 و 8 ساعت با استفاده از IPTG 1mM در دمای cº20 بیش‌ترین بیان را دارند.

استنتاج: با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تأثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب میتواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتریها یاری کند.

متن کامل [PDF 776 kb]   (841 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي-کامل | موضوع مقاله: بیوشیمی

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
کد امنیتی را در کادر بنویسید

ارسال پیام به نویسنده مسئول


کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2015 All Rights Reserved | Journal of Mazandaran University of Medical Sciences

Designed & Developed by : Yektaweb