سابقه و هدف: بیماری بروسلوز یک بیماری مشترک انسان و دام است. با توجه به ویژگی‌هایی مانند سخت رشد بودن، خطرات مرتبط با کشت و وجود واکنش‌های متقاطع با باکتری‌های دیگر در آزمون سرولوژیک، در مطالعه حاضر روش Real-time PCR Multiplex به‌منظور شناسایی گونه‌های شایع باکتری بروسلا (Brucella) ارزیابی شد.

مواد و روش‌ها: این مطالعه تجربی در دانشگاه علوم پزشکی همدان و در سال 1394 در دو مرحله بیوانفورماتیکی و آنالیتیکی صورت گرفت. در مطالعه حاضر، یک پرایمر همگانی برای شناسایی همه‌ی گونه‌های جنس بروسلا و دو پرایمر اختصاصی دیگر برای گونه‌های بروسلا ملی‌تنسیس (B. melitensis) و بروسلا آبورتوس (B. abortus) که بیشترین شیوع را دارند، طراحی شد. ژن‌های ITS، BMEII-0466 و BruAB2-0168 به‌عنوان ژن‌های هدف به‌ترتیب برای جنس بروسلا، بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلا آبورتوس انتخاب گردیدند. اختصاصیت و حساسیت پرایمرها نیز در مرحله آنالیتیکی ارزیابی شدند.

یافته‌ها: پرایمر همگانی، جنس بروسلا را در 83 جفت باز و دمای ذوب معادل 5/82 درجه سانتی‌گراد شناسایی می‌کند. به‌طور اختصاصی، پرایمرهای بروسلا ملی‌تنسیس و بروسلا آبورتوس به‌ترتیب در 121 و 285 جفت باز و دماهای ذوب معادل 84 و 87 درجه سانتی‌گراد، این باکتری‌ها را شناسایی می‌کنند. حساسیت به‌دست ‌آمده برای پرایمر همگانی و بروسلا آبورتوس، fg 50 و برای بروسلا ملی‌تنسیس fg 100 بود.

استنتاج: با توجه به نتایج به‌دست‌ آمده توسط این مطالعه، پرایمرهای طراحی‌شده حساسیت و اختصاصیت قابل‌قبول و بالایی از خود نشان دادند که می‌توان برای ارزیابی آن‌ها در آزمایش‌های کلینیکی به همراه روش کشت استفاده کرد.