Yari K, Fatemi S S, Tavallaei M, Moradi M T. A Quantitative Comparison of Recombinant Hc Domain of Clostridium Botulinum Neurotoxin A in Escherichia Coli in Batch and Fed-Batch Cultivations. J Mazandaran Univ Med Sci 2013; 23 (104) :2-10
URL:
http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-2618-fa.html
یاری خیراله، فاطمی سید صفاعلی، تولائی محمود، مرادی محمدطاهر. مقایسه کمی تولید پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم A در کشتهای ناپیوسته و ناپیوسته خوراکدهیشده باکتری اشرشیا کلی. مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران. 1392; 23 (104) :2-10
URL: http://jmums.mazums.ac.ir/article-1-2618-fa.html
چکیده: (8398 مشاهده)
سابقه و هدف: پروتئین 50 کیلو دالتونی واقع در انتهای کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A (BoNT/A-Hc) امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار میرود. هدف از این پژوهش بررسی تولید این پروتئین نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی در کشتهای با تراکم سلولی بالا (ناپیوسته خوراکدهیشده) و مقایسه تولید آن با کشتهای ناپیوسته بود.
مواد و روشها: در این مطالعه، رشد باکتری اشرشیا کلی حاوی پلاسمید نوترکیب در محیط M9 اصلاحشده با فرایند کشت ناپیوسته بررسی گردید. به منظور افزایش بیان پروتئین نوترکیب، میزان غلظت القاکننده Isopropyl β-D-thiogalactoside و زمان القا در Fermentor با حجم کاری 2 لیتر، به کمک روش آماری Taguchi بهینه گردید. سپس کشت ناپیوسته خوراکدهیشده با روش خوراکدهینمایی با حجم ثابت تا رسیدن به تراکم سلولی بالا انجام گرفت. در پایان میزان بیان پروتئین نوترکیب هدف به کمک روش Bradford و دانسیتومتری ژل SDS-PAGE محاسبه شد.
یافتهها: در شرایط بهینهشده کشت ناپیوسته و ناپیوسته خوراکدهیشده، به ترتیب مقدار 62 و 486 میلیگرم پروتئین نوترکیب BoNT/A-Hc به ازای یک لیتر از محیط کشت حاصل گردید.
استنتاج: بر اساس یافتههای این تحقیق میتوان نتیجهگیری کرد که رسیدن به تراکم سلولی بالا در کشتهای ناپیوسته خوراکدهیشده در افزایش بازدهی تولید پروتئینهای نوترکیب بسیار مؤثر است.
نوع مطالعه:
پژوهشي-کامل |