سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخرهای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونههای مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین C را جهت دفاع و شکار ترشح میکند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین C به اشیرشیاکلی سویه BL21، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان میباشد.
مواد و روشها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتریها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن FraC بهوسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتریها روی محیط حاوی آنتیبیوتیک مناسب (آمپیسیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیشتر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید GF-1 صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیمهای NcoI وHind ІІІ و همچنین کنترل PCR قرار گرفتند. بعد از تأیید حضور پلاسمید حاوی ژن FraC در باکتری میزبان، باکتریها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین FraC توسط IPTG 1mM در زمانهای مختلف و دمای cº20 القا شدند. پس از جمعآوری باکتریهای بیانکننده FraC در زمانهای مختلف، بیان آنها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلیآکریل آمید(SDS-PAGE) مشهود بود.
یافتهها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن FraC با موفقیت انتقال یافت. همچنین نتایج SDS-PAGE نشان داد که FraC در زمانهای 6 و 8 ساعت با استفاده از IPTG 1mM در دمای cº20 بیشترین بیان را دارند.
استنتاج: با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تأثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب میتواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتریها یاری کند.
بازنشر اطلاعات | |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |